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Bradford's reagent

Bradford试剂

公司名称: Sigma-Aldrich
产品编号: B6916
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Company-protocol()
Other protocol()

Isolating Multiple Extracellular Vesicles Subsets, Including Exosomes and Membrane Vesicles, from Bovine Milk Using Sodium Citrate and Differential Ultracentrifugation
Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract]  Milk is a complex fluid that contains various types of proteins and extracellular vesicles (EVs). Some proteins can mingle with EVs, and interfere with their isolation. Among these proteins, caseins form micelles of a size comparable to milk EVs, and can thus be co-isolated with EVs. Preliminary steps that affect milk are crucial for EV isolation and impact the purity and abundance of isolated EVs. In the course of our previous works on cow’s milk EVs, we found that sodium citrate (1% final), which is a biocompatible reagent capable of breaking down casein micelles into 40-nm monomers, ... [摘要]  [摘要 ] 牛奶是一种复杂的流体,其中包含各种类型的蛋白质和细胞外囊泡(EVs),有些蛋白质会与EV混合在一起,并干扰其分离,在这些蛋白质中,酪蛋白形成的胶束大小与牛奶EV相当因此,可以将其与电动汽车共隔离。影响牛奶的初步步骤对于电动汽车的隔离,影响分离电动汽车的纯度和丰度至关重要。在我们以前对牛奶电动汽车的研究过程中,我们发现柠檬酸钠(最终含量为1% )是一种生物相容性试剂,能够将酪蛋白胶束分解为40 nm单体,可分离出大量的EV,而酪蛋白或其他污染蛋白的沉淀率却很低。 EV子集,深入表征其形态,蛋白质含量和小分子RNA富集模式。我们还能够描述其在小鼠肠道炎症模型中的生物学功能。具体来说,是从同一样品中分离出不同乳EV子集的培养基。更具体地说,我们着重介绍了使用柠檬酸钠作为标准化方法来分离和研究乳EV的方法及其在差分超速离心之外的分离技术的潜力。

[背景 ] 在我们以前的出版物(本穆萨等人。,2016 ,2017,2019b和2019c;本穆萨和普罗沃斯特,2019) ,我们强调,牛乳是包含细胞外无数的复杂流体囊泡。(EV)用的子集在这些之中,外泌体是多囊体(MVB)与细胞膜融合时释放的约100 nm囊泡,进行超速离心时,这些沉淀物的离心速度等于或高于100,000 xg (P100K,其中P代表沉淀)(Pieters 等。,2015) ...

In vitro Autophosphorylation and Phosphotransfer Assay of Cyanobacterial Histidine Kinase 2
Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract]  This is a detailed protocol of an autophosphorylation and phosphotransfer activities of Synechocystis sp. PCC 6803 full-length Histidine Kinase 2 (Hik2) protein described by Ibrahim et al., 2016. In this protocol, radioactively labelled ATP was used to study an autophosphorylation and phosphotransfer activity of the full-length Hik2 protein. [摘要]  这是集胞藻的自磷酸化和磷酸转移活性的详细方案。在该方案中,使用放射性标记的ATP来研究全长Hik2的自磷酸化和磷酸转移活性,所述磷酸转移活性是由Ibrahim等人在2016年描述的。蛋白。
关键字:组氨酸激酶2,自身磷酸化,磷酸转移,Rre1,RppA,集胞藻。 PCC 6803

[背景] 蛋白磷酸化是发生在每个活生物体中的蛋白质的重要​​翻译后修饰。蛋白激酶(催化蛋白质磷酸化的酶)的活性首先由Burnett和Kennedy在1954年描述,其中它们通过肝酶显示酪蛋白的磷酸化(Burnett和Kennedy,1954)。然而,它的意义直到20世纪70年代和80年代才被欣赏(Cohen,2002)。可以使用偶联测定或直接用放射性标记的ATP研究磷酸γ-磷酸从ATP分子转移到蛋白质。基于掺入32 ...

Separation of Free and Bound cAMP in Mycobacteria
Author:
Date:
2016-07-20
[Abstract]  Mycobacterial genomes encode a plethora of genes that are involved in the synthesis, utilization and degradation of cAMP. The genome of M. tuberculosis H37Rv, for example, encodes 16 adenylyl cyclases and 10 genes harbouring the cyclic nucleotide-binding (CNB) domain (Shenoy and Visweswariah, 2006). Cyclic AMP is efficiently secreted by mycobacteria, and cytosolic as well as extracellular levels of cAMP can reach hundreds of micromolar. We have recently reported that an abundantly expressed universal stress protein (USP; Rv1636 in M. tuberculosis H37Rv and MSMEG_3811 in M. ... [摘要]  分枝杆菌基因组编码涉及cAMP的合成,利用和降解的大量基因。例如,结核分枝杆菌H37Rv的基因组编码16个腺苷酸环化酶和10个携带环核苷酸结合(CNB)结构域的基因(Shenoy和Visweswariah,2006)。循环AMP由分枝杆菌有效分泌,细胞溶质以及细胞外cAMP水平可达数百微摩尔。我们最近报道,大量表达的普遍应激蛋白(USP; Rv1636在结核分枝杆菌H37Rv和MSMEG_3811分别在耻垢分枝杆菌中)分别结合cAMP(Banerjee等,2015)。鉴于存在于分枝杆菌中的cAMP结合蛋白的数量,预期细胞内cAMP的显着部分可能与蛋白质结合。通常用于测量cAMP的方法是放射免疫测定(RIA)和ELISA。然而,这些方法包括将cAMP“结合”解离成蛋白质的样品的预先酸化,因此代表样品中存在的“总”cAMP。在本协议中,我们描述了一种将cAMP'结合'蛋白质与蛋白质“自由”分离或与蛋白质不相关的方法。这通过使细胞溶质级分或培养物上清液通过具有3kDa截止值的膜过滤来进行。只有'自由'cAMP才能通过膜。因此,滤液中的cAMP浓度代表样品中的“游离”cAMP。原始细胞溶质级分或培养上清液中的环AMP水平代表“总”cAMP浓度。从“总”中减去“自由”提供了与蛋白质结合的cAMP量。

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