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Dimethyl sulfoxide (DMSO)

二甲亚砜(DMSO)

公司名称: Sigma-Aldrich
产品编号: D8418
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Isolation and High Throughput Flow Cytometric Apoptosis Assay of Human Neutrophils to Enable Compound Library Screening
Author:
Date:
2020-06-05
[Abstract]  The study of human neutrophils in vitro is challenging due to their short half-life and propensity for activation. However, with careful handling and manipulation in the laboratory, they can be a powerful tool to investigate immune responses in health and disease. Here we describe a method for the isolation of human neutrophils from peripheral blood samples, followed by a high-throughput screen to assess the efficacy of a library of compounds in inducing neutrophil apoptosis, which may have therapeutic potential in neutrophil-driven diseases. This protocol is based on ... [摘要]  [摘要] 人类嗜中性粒细胞的研究 由于其半衰期短且易于活化,因此体外具有挑战性,然而,通过在实验室中的仔细处理和操纵,它们可以成为研究健康和疾病中免疫反应的有力工具。在此,我们介绍了一种分离方法外周血样本中的人类嗜中性粒细胞,然后进行高通量筛选,以评估化合物库诱导嗜中性粒细胞凋亡的功效,该化合物在嗜中性粒细胞驱动的疾病中可能具有治疗潜力。此规程基于先前发表的嗜中性粒细胞分离方法利用红细胞的葡聚糖沉降,接着用等离子体/粒细胞的分离的Percoll 〜1×10个的不连续梯度centrifugation.Yields 6 每嗜中性粒细胞毫升的血液,和>的纯度95个%嗜中性粒细胞是典型的。嗜中性粒细胞与经处理的激酶抑制剂文库,然后通过流式细胞仪评估中性粒细胞凋亡的速率。低通量用于高通量筛选人类原代免疫细胞,以鉴定具有修饰嗜中性粒细胞功能的化合物,并可根据需要进行修饰以评估其他表型。

[背景] 中性粒细胞是重要的先天免疫细胞与键的角色防御抵抗infection.They是短暂的细胞中,在感染和inflammat部位延长6-8小时循环典型的半衰期离子(萨默斯等人。 。,2010 ; Hidalgo。Et Al ...

Direct Reprogramming of Mouse Embryonic Fibroblasts to Conventional Type 1 Dendritic Cells by Enforced Expression of Transcription Factors
Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract]  Ectopic expression of transcription factor combinations has been recently demonstrated to reprogram differentiated somatic cells towards the dendritic cell (DC) lineage without reversion to a multipotent state. DCs have the ability to induce potent and long-lasting adaptive immune responses. In particular, conventional type 1 DCs (cDC1s) excel on antigen cross-presentation, a critical step for inducing CD8+ T cell cytotoxic responses. The rarity of naturally occurring cDC1s and lack of in vitro methodologies for the generation of pure cDC1 populations strongly hinders the ... [摘要]  [摘要] 转录因子组合的异位表达最近被证明可以将分化的体细胞重编程为树突状细胞(DC)谱系,而不会回复到多能状态。DC具有诱导有效和持久的适应性免疫应答的能力。在特定的常规类型1的DC(cDC1s)练成抗原交叉呈递,用于诱导CD8的关键步骤+ T细胞的细胞毒性应答。天然存在的cDC1的稀有性和缺乏用于生成纯cDC1群体的体外方法论,严重阻碍了对cDC1谱系规格和功能的研究。在这里,我们描述了用于生成感应DC(iDC)的协议 慢病毒介导的转录因子PU.1,IRF8和BATF3在小鼠胚胎成纤维细胞中的表达。iDC 在9天内获得DC形态,cDC1表型和转录特征。使用此协议生成的iDC 具有对炎症刺激,吞噬死细胞,将抗原加工并交叉呈递给CD8 + T细胞的功能。DC重新编程提供了一个简单易处理的系统,可以生成大量的cDC1类细胞用于高内涵筛选,从而开辟了新途径,可以更好地了解cDC1的规格和功能。将来,在成纤维细胞中忠实诱导cDC1命运可能会导致产生患者特定的疫苗接种DC。

[背景技术树突状细胞(DC)是专业的抗原呈递细胞,专门用于识别,加工和呈递T细胞抗原,在诱导适应性免疫应答和免疫记忆中起关键作用(Me rad 等,2013)。DC可以分为4个主要子集:浆细胞样DC(pDC ),大量1型干扰素的产生者,循环单核细胞衍生的单核细胞衍生DC 和常规DC(cDC ...

Cell-free Reconstitution of the Packaging of Cargo Proteins into Vesicles at the trans Golgi Network
Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract]  Protein sorting at the trans Golgi network (TGN) plays important roles in targeting newly synthesized proteins to their specific destinations. The aim of this proposal is to reconstitute the packaging of non-Golgi resident cargo proteins into vesicles at the TGN, utilizing rat liver cytosol, semi-intact mammalian cells and nucleotides. The protocol describes how to perform the vesicle formation assay, how to isolate vesicles and how to detect cargo proteins in vesicles. This reconstitution assay can be used to quantitatively measure the efficiency of the packaging of a specific cargo ... [摘要]  [摘要] 反式高尔基体网络(TGN)上的蛋白质分选在将新合成的蛋白质靶向其特定目的地方面起着重要作用。该提议的目的是利用大鼠肝细胞溶质,半完整的哺乳动物细胞和核苷酸,在TGN处将非高尔基驻留的货物蛋白重新包装成囊泡。该协议描述了如何进行囊泡形成测定,如何分离囊泡以及如何检测囊泡中的货物蛋白。该重构测定法可用于定量测量在特定实验条件下将特定货物蛋白包装到TGN的运输小泡中的效率。

[背景] 的反式高尔基体网络(TGN)是在分泌运送路径的必要的交通枢纽。为了确保水泡运输的保真度,真核细胞利用各种蛋白质分选设备将特定的货物蛋白质准确地包装到TGN的运输小泡中,然后运至特定的目的地(Guo 等人,2014)。为了加深我们对TGN分选过程特异性的理解,重要的是开发一种能够忠实地重构TGN囊泡形成和货物分选过程的分析方法。该测定法可用于直接和定量地测量特定因子在调节特定货物蛋白包装到运输小泡中的作用。从内质网(ER)将货物蛋白包装到COPII囊泡中的无细胞重构已得到很好的建立(Kim 等,2005; Kim 等,2007; Merte 等,2010; Yuan 等。,2018;Niu 等,2019;)。已经开发出一种体外测定法,其在TGN处重构特定货物蛋白TGN46在运输小泡中的释放(Ponnambalam 等,1996;Wakana ...

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