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HEPES

HEPES

公司名称: Sigma-Aldrich
产品编号: H4034
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Nuclear/Cytoplasmic Fractionation of Proteins from Caenorhabditis elegans
Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract]  C. elegans is widely used to investigate biological processes related to health and disease. To study protein localization, fluorescently-tagged proteins can be used in vivo or immunohistochemistry can be performed in whole worms. Here, we describe a technique to localize a protein of interest at a subcellular level in C. elegans lysates, which can give insight into the location, function and/or toxicity of proteins. [摘要]  ℃。 线虫>广泛用于研究与健康和疾病相关的生物过程。 为了研究蛋白质定位,荧光标记的蛋白质可用于体内>或免疫组织化学可在整个蠕虫中进行。 在这里,我们描述了一种在 C中亚细胞水平定位感兴趣的蛋白质的技术。 线虫>裂解物,可以洞察蛋白质的位置,功能和/或毒性。
【背景】亚细胞分级已用于不同的模式生物中以鉴定和研究细胞核,细胞膜和细胞质中的蛋白质功能。 例如,当聚集倾向蛋白定位于细胞核或细胞质中时,它们的毒性可能更大(Kontopoulos et al。>,2006; Barmada et al。>,2010)。 在这里,我们提供了一个协议(改编自Chen et al。>,2000和La Rocca et al。>,2007)来定位的细胞核和细胞质组分中的特定蛋白质。>℃。线虫>。

HCV Reporter System (Viral Infection-Activated Split-Intein-Mediated Reporter System) for Testing Virus Cell-to-cell Transmission ex-vivo
Author:
Date:
2018-08-05
[Abstract]  Hepatitis C virus (HCV) spread involves two distinct entry pathways: cell-free transmission and cell-to-cell transmission. Cell-to-cell transmission is not only an efficient way for viruses to spread but also an effective method for escaping neutralizing antibodies. We adapted the viral infection-activated split-intein-mediated reporter system (VISI) and developed a straightforward model for Live-cell monitoring of HCV cell-to-cell transmission ex-vivo: co-culture of HCV infected donor cells (red signal) with uninfected recipient cells (green signal) and elimination of the cell-free ... [摘要]  丙型肝炎病毒(HCV)传播涉及两种不同的进入途径:无细胞传播和细胞间传播。 细胞间传播不仅是病毒传播的有效方式,也是逃避中和抗体的有效方法。 我们采用了病毒感染激活的分裂 - 内含肽介导的报告系统(VISI),并开发了一种直接模型,用于活细胞监测HCV细胞间传递离体:共培养 HCV感染的供体细胞(红色信号)与未感染的受体细胞(绿色信号)和通过在上清液中加入有效的中和抗体AR3A消除无细胞的传递。 利用该模型,可以通过计数受体细胞的绿色信号指定的病灶数来评估细胞间传递的效率。

【背景】越来越多的证据证明病毒可以在受感染的组织中使用不同的传播途径(Sattentau,2008; Zhong et al。,2013)。对于HCV传播,无细胞传播和细胞间传播均可介导肝细胞之间的病毒转移。虽然无细胞传播引发HCV感染,但认为细胞 - 细胞传递直接将HCV转移至相邻的肝细胞。它提供了抵抗中和抗体并有助于病毒持久性的极好方法(Brimacombe et al。,2011; Xiao et al。,2014)。之前的文章也证明了一些促进细胞传递的宿主因子,如清道夫受体BI(SR-BI),CD81,紧密连接蛋白claudin-1(CLDN1),Occludin(OCLN),表皮生长因子受体(EGFR)。 (Witteveldt et al。,2009; ...

Fluorescent Labeling of Rat-tail Collagen for 3D Fluorescence Imaging
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract]  Rat tail collagen solutions have been used as polymerizable in vitro three-dimensional (3D) extracellular matrix (ECM) gels for single and collective cell migration assays as well as spheroid formation. These 3D hydrogels are a relatively inexpensive, simple to use model system that can mimic the in vivo physical characteristics of numerous tissues within the body, namely the skin. While confocal imaging techniques such as fluorescence reflection and two-photon microscopy are able to visualize collagen fibrils during 3D imaging without fluorescence, other imaging modalities ... [摘要]  大鼠尾胶原溶液已被用作可聚合的体外三维(3D)细胞外基质(ECM)凝胶,用于单一和集体细胞迁移测定以及球状体形成。 这些3D水凝胶是相对便宜,易于使用的模型系统,其可以模拟体内许多组织(即皮肤)的体内物理特征。 虽然诸如荧光反射和双光子显微镜的共焦成像技术能够在没有荧光的3D成像期间可视化胶原原纤维,但是其他成像模式需要荧光染料直接缀合到胶原。 在这里,我们详细介绍了如何生成用荧光染料标记的3D胶原凝胶。 此外,我们还经历了可重复生成适用于活细胞3D成像技术的明亮胶原水凝胶所需的步骤。

【背景】自20世纪50年代以来,Paul Weiss和Beatrice Garber最初观察到增加血浆浓度(纤维蛋白)对间充质细胞形态的影响(Weiss和Garber,1952),开始研究细胞迁移和细胞与周围微环境的相互作用。在随后的几十年中,生物化学家开始深入研究从鼠尾胶原中纯化提取物,并开始将其用作高度可聚合的3D基质(Fitch et al。,1955; Gross et al。,1955; Chandrakasan et al。,1976)。直到20世纪90年代,3D矩阵才真正对细胞生物学界有用,尤其是研究细胞迁移(Friedl et ...

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