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QIAquickPCR Purification Kit

QIAquick PCR纯化试剂盒

公司名称: QIAGEN
产品编号: 28104
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TetR Regulated in vivo Repression Technology to Identify Conditional Gene Silencing in Genetically Engineerable Bacteria Using Vibrio cholerae Murine Infections as Model System
Author:
Date:
2020-10-05
[Abstract]  Investigation of bacterial gene regulation upon environmental changes is still a challenging task. For example, Vibrio cholerae, a pathogen of the human gastrointestinal tract, faces diverse transient conditions in different compartments upon oral ingestion. Genetic reporter systems have been demonstrated to be extremely powerful tools to unravel gene regulation events in complex conditions, but so far focused mainly on gene induction. Herein, we describe the TetR-controlled recombination-based in vivo expression technology TRIVET, which allows detection of gene silencing ... [摘要]  [摘要]研究细菌基因对环境变化的调控仍然是一项艰巨的任务。例如,人胃肠道的病原体霍乱弧菌在口服后会在不同的隔室中遇到各种短暂的状况。事实证明,遗传报告系统是揭示复杂条件下基因调控事件的极有力工具,但到目前为止,它主要集中在基因诱导上。在本文中,我们描述了基于TetR控制的重组的体内表达技术TRIVET,该技术可检测基因沉默事件。TRIVET类似于体内表达技术(IVET)以及基于重组的体内变异体 表达技术(RIVET),用于鉴定宿主定殖过程中几种细菌的条件基因诱导。像它的前辈一样,TRIVET是一个基于单细胞的报告系统,可以通过耐药谱的表型变化以时空方式分析细菌基因的阻遏。简而言之,无启动子的tetR (编码转录阻遏物TetR)可通过转座子诱变随机地整合到细菌基因组中,或通过同源重组在目标启动子的下游特异性整合到细菌基因组中。的TetR导致的去阻遏的转录表达的减少的TetR控制解离TNPR,这反过来又导致切除ö F A Ñ抗生素抗性盒(也称为RES-盒)和改变的电阻曲线可观察到的通过划线上氨苄青霉素和卡那霉素板。然后可以将这种改变量化为抗性和非抗性分离株之间的比例。此外,新引入的第二报道基因,promot erless ...

HIV-CRISPR: A CRISPR/Cas9 Screening Method to Identify Genes Affecting HIV Replication
Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract]  Screening with CRISPR/Cas9 technology has already led to significant discoveries in the fields of cancer biology, cell biology and virology. Because of the relatively low false discovery rates and the ability to perform high-throughput, pooled approaches, it has rapidly become the assay of choice for screening studies, including whole-genome screens. Here, we describe a CRISPR screening protocol that allows for efficient screening of the entire life cycle of HIV-1 through packaging of the HIV-CRISPR lentiviral genomes by infecting HIV-1 virus in trans. [摘要]  [摘要 ] CRISPR / Cas9技术的筛选已经在癌症生物学,细胞生物学和病毒学领域引起了重大发现。由于相对较低的错误发现率和执行高通量,合并方法的能力,它发展迅速。成为筛选研究(包括全基因组筛选)的首选检测方法。在此,我们描述了一种CRISPR筛选方案,该方案可通过感染HIV-CRISPR慢病毒基因组来包装,从而有效筛选HIV-1的整个生命周期。病毒1 在 跨。

[背景] 遗传筛选是鉴定影响包括人类免疫缺陷病毒(HIV)在内的病毒复制的新基因的有力工具。鉴定对HIV感染重要的宿主基因有助于增强对HIV复制,进化,传播和发病机制的认识,这是关键利益所在。特别是在过去十年中,通常是干扰素(IFN)刺激基因(ISG)的HIV限制因子的发现已成为逆转录病毒学领域的关键发展。限制因子已集中在过度表达筛选上,以鉴定作用广泛的抗病毒ISG (Schoggins 等,2011)或专门针对HIV的因子(Kane 等,2016)。通过转染对HIV限制因子进行了全基因组筛选siRNA的池池在靶细胞(刘等人,2011年)。然而,这些方法缺乏稳健性,Versa的钛Lity,和高通量方面 因此,我们使用CRISPR / Cas9技术开发了一种创新的ap 方法,并依靠HIV交叉包装通过CRISPR / Cas9文库转导的细胞中表达的慢病毒基因组的能力(OhAinle ...

Generating Loss-of-function iPSC Lines with Combined CRISPR Indel Formation and Reprogramming from Human Fibroblasts
Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract]  For both disease and basic science research, loss-of-function (LOF) mutations are vitally important. Herein, we provide a simple stream-lined protocol for generating LOF iPSC lines that circumvents the technical challenges of traditional gene-editing and cloning of established iPSC lines by combining the introduction of the CRISPR vector concurrently with episomal reprogramming plasmids into fibroblasts. Our experiments have produced nearly even numbers of all 3 genotypes in autosomal genes. In addition, we provide a detailed approach for maintaining and genotyping 96-well plates of iPSC ... [摘要]  对于疾病和基础科学研究而言,功能丧失(LOF)突变是非常重要的。 在这里,我们提供了一个简单的流线化协议来产生LOF iPSC系列,通过将CRISPR载体与附加型重编程质粒同时引入成纤维细胞,规避了传统基因编辑和已建立的iPSC系的克隆的技术挑战。 我们的实验已经产生了常染色体基因中所有3种基因型的几乎偶数。 此外,我们提供了一个详细的方法来维护和iPSC克隆的96孔板的基因分型。

【背景】CRISPR / Cas9技术允许简单且特异地针对特定基因组位置进行基因编辑。将该技术与诱导性多能干细胞(iPSC)的疾病建模和再生医学潜力相结合将继续对生物医学研究产生前所未有的影响。然而,使CRISPR / Cas9系统适应iPSC已经提出了几个挑战。在细胞系中进行基因编辑的传统方法是用表达Cas9蛋白质的质粒和指导RNA(gRNA)转染细胞,然后产生单克隆并筛选所需的遗传改变。不幸的是,iPSC不适用于单细胞克隆。已经开发了几种补充媒介和克隆方法来克服这一困难,但仍然充满昂贵的设备(低氧培养箱),困难的技术步骤(FACS分选的单个iPSC的存活)或劳动密集型方案(亚克隆)(Forsyth ,2006; Miyaoka ...

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