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QIAquick PCR Purification Kit

QIAquick PCR纯化试剂盒

公司名称: QIAGEN
产品编号: 28104
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HIV-CRISPR: A CRISPR/Cas9 Screening Method to Identify Genes Affecting HIV Replication
Author:
Date:
2020-05-05
[Abstract]  Screening with CRISPR/Cas9 technology has already led to significant discoveries in the fields of cancer biology, cell biology and virology. Because of the relatively low false discovery rates and the ability to perform high-throughput, pooled approaches, it has rapidly become the assay of choice for screening studies, including whole-genome screens. Here, we describe a CRISPR screening protocol that allows for efficient screening of the entire life cycle of HIV-1 through packaging of the HIV-CRISPR lentiviral genomes by infecting HIV-1 virus in trans. [摘要]  [摘要 ] CRISPR / Cas9技术的筛选已经在癌症生物学,细胞生物学和病毒学领域引起了重大发现。由于相对较低的错误发现率和执行高通量,合并方法的能力,它发展迅速。成为筛选研究(包括全基因组筛选)的首选检测方法。在此,我们描述了一种CRISPR筛选方案,该方案可通过感染HIV-CRISPR慢病毒基因组来包装,从而有效筛选HIV-1的整个生命周期。病毒1 在 跨。

[背景] 遗传筛选是鉴定影响包括人类免疫缺陷病毒(HIV)在内的病毒复制的新基因的有力工具。鉴定对HIV感染重要的宿主基因有助于增强对HIV复制,进化,传播和发病机制的认识,这是关键利益所在。特别是在过去十年中,通常是干扰素(IFN)刺激基因(ISG)的HIV限制因子的发现已成为逆转录病毒学领域的关键发展。限制因子已集中在过度表达筛选上,以鉴定作用广泛的抗病毒ISG (Schoggins 等,2011)或专门针对HIV的因子(Kane 等,2016)。通过转染对HIV限制因子进行了全基因组筛选siRNA的池池在靶细胞(刘等人,2011年)。然而,这些方法缺乏稳健性,Versa的钛Lity,和高通量方面 因此,我们使用CRISPR / Cas9技术开发了一种创新的ap 方法,并依靠HIV交叉包装通过CRISPR / Cas9文库转导的细胞中表达的慢病毒基因组的能力(OhAinle ...

Generating Loss-of-function iPSC Lines with Combined CRISPR Indel Formation and Reprogramming from Human Fibroblasts
Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract]  For both disease and basic science research, loss-of-function (LOF) mutations are vitally important. Herein, we provide a simple stream-lined protocol for generating LOF iPSC lines that circumvents the technical challenges of traditional gene-editing and cloning of established iPSC lines by combining the introduction of the CRISPR vector concurrently with episomal reprogramming plasmids into fibroblasts. Our experiments have produced nearly even numbers of all 3 genotypes in autosomal genes. In addition, we provide a detailed approach for maintaining and genotyping 96-well plates of iPSC ... [摘要]  对于疾病和基础科学研究而言,功能丧失(LOF)突变是非常重要的。 在这里,我们提供了一个简单的流线化协议来产生LOF iPSC系列,通过将CRISPR载体与附加型重编程质粒同时引入成纤维细胞,规避了传统基因编辑和已建立的iPSC系的克隆的技术挑战。 我们的实验已经产生了常染色体基因中所有3种基因型的几乎偶数。 此外,我们提供了一个详细的方法来维护和iPSC克隆的96孔板的基因分型。

【背景】CRISPR / Cas9技术允许简单且特异地针对特定基因组位置进行基因编辑。将该技术与诱导性多能干细胞(iPSC)的疾病建模和再生医学潜力相结合将继续对生物医学研究产生前所未有的影响。然而,使CRISPR / Cas9系统适应iPSC已经提出了几个挑战。在细胞系中进行基因编辑的传统方法是用表达Cas9蛋白质的质粒和指导RNA(gRNA)转染细胞,然后产生单克隆并筛选所需的遗传改变。不幸的是,iPSC不适用于单细胞克隆。已经开发了几种补充媒介和克隆方法来克服这一困难,但仍然充满昂贵的设备(低氧培养箱),困难的技术步骤(FACS分选的单个iPSC的存活)或劳动密集型方案(亚克隆)(Forsyth ,2006; Miyaoka ...

In situ Hybridization (ISH) in Preparasitic and Parasitic Stages of the Plant-parasitic Nematode Meloidogyne spp.
Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract]  The spatio-temporal expression pattern of a gene provides important indications to better understand its biological function. In situ hybridization (ISH) uses a labeled complementary single-stranded RNA or DNA probe to localize gene transcripts in a whole organism, a whole organ or a section of tissue. We adapted the ISH technique to the plant parasite Meloidogyne spp. (root-knot nematode) to visualize RNAs both in free-living preparasitic juveniles and in parasitic stages settled in the plant tissues. We describe each step of the probe synthesis, digoxigenin (DIG) labeling, ... [摘要]  基因的时空表达模式为更好地理解其生物学功能提供了重要的指示。 原位杂交(ISH)使用标记的互补单链RNA或DNA探针来定位整个生物体,整个器官或一部分组织中的基因转录物。 我们将ISH技术应用于植物寄生虫

【背景】到目前为止,植物寄生性线虫的稳定转化尚未成功。 ISH能够在整个装载的Meloidogyne spp中分析体内时空基因表达。线虫。这些根结线虫在土壤中以微小蚓状幼虫(J2)形式孵化并感染宿主植物根部。 J2s穿透根部并迁移到根部维管柱状细胞。幼虫定居在根部,发育成J3和J4寄生幼鱼,诱导分化专化饲养细胞。线虫最终发育成梨形雌性,将在根表面释放数百个卵。在这里,我们报告了一个详细的协议来检测准备性整体安装J2s和寄生阶段中的单个RNA分子。寄生虫阶段的ISH需要在感染根部提取线虫前一天采取额外的程序。我们描述了在线虫整个组织中使用地高辛(DIG)标记的cDNA探针检测转录物。

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