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Phenylmethanesulfonyl fluoride

苯基甲磺酰氟

公司名称: Sigma-Aldrich
产品编号: P7626
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Phagocytosis Assay for α-Synuclein Fibril Uptake by Mouse Primary Microglia
Author:
Date:
2018-09-05
[Abstract]  Microglia are professional phagocytes in the brain and deficiency in their phagocytic activity plays an important role in Parkinson’s disease. This protocol mainly describes the phagocytosis assay for uptake of α-synuclein preformed fibrils, a pathologic form of α-synuclein, by primary microglia. [摘要]  小胶质细胞是大脑中的专业吞噬细胞,其吞噬活性的缺乏在帕金森病中起重要作用。 该方案主要描述了通过原代小胶质细胞摄取α-突触核蛋白预先形成的原纤维(α-突触核蛋白的病理形式)的吞噬作用测定。

【背景】作为大脑的免疫细胞,小胶质细胞在中枢神经系统中起着关键作用。在生理状态下,小胶质细胞不断探索周围环境并参与突触修剪。小胶质细胞可被任何类型的病理事件或脑内稳态的变化激活(Wolf et al。,2017)。激活后,小胶质细胞经历形态学变化,增殖,分泌炎性细胞因子,迁移至病变部位,吞噬病原体,病细胞,碎片,甚至细胞外蛋白质聚集体(Kettenmann et al。,2011; Fu et al。,2014)。 α-突触核蛋白是神经元中的丰富蛋白质,并且是帕金森病中称为路易体和路易神经突的神经元内包涵体的主要成分(Luk 等人,,2012)。最近的研究表明α-突触核蛋白经历细胞间扩散,小胶质细胞是α-突触核蛋白的主要清除剂,它可能承担来自神经元的α-突触核蛋白的负担(Wolf et al。,2017 )。在这里,我们描述了使用人α-突触核蛋白单体产生预先形成的原纤维并通过小胶质细胞吞噬作用测量α-突触核蛋白预先形成的原纤维的摄取的方案(Du et al。,2017)。

RNA Immunoprecipitation (RIP) Sequencing of Pri-miRNAs Associated with the Dicing Complex in Arabidopsis
Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract]  RNA immunoprecipitation (RIP) is an antibody-based technique used to map in vivo RNA-protein interactions. DBR1, an RNA debranching enzyme, is responsible for the debranching of lariat RNA, for the degradation and turnover of lariat RNAs. It is well known that primary miRNA (Pri-miRNA) is recognized and further processed into mature miRNA by the Dicing complex mainly composed of DCL1 and HYL1. Due to the low abundance of pri-miRNAs, RIP followed qRT-PCR has been widely used to evaluate the binding efficiency of the Dicing complex with pri-miRNAs in previous studies. Therefore, the ... [摘要]  RNA免疫沉淀(RIP)是一种基于抗体的技术,用于绘制体内 RNA-蛋白质相互作用。 DBR1是一种RNA脱支酶,负责套索RNA的脱支,用于套索RNA的降解和转换。众所周知,主要miRNA(Pri-miRNA)被主要由DCL1和HYL1组成的切割复合物识别并进一步加工成成熟miRNA。由于pri-miRNA的丰度较低,RIP随后的qRT-PCR已被广泛用于评估切割复合物与pri-miRNA在先前研究中的结合效率。因此,缺乏对具有pri-miRNA的切割复合物的全基因组评估。随着高通量测序技术的改进,我们成功地使用RIP-seq比较了Dicing复合物与野生型和 dbr1-2 突变体之间的pri-miRNA的结合效率。 。在该方案中,我们提供了在两种不同基因型之间的HYL1-YFP和DCL1-YFP转基因植物中使用GFP捕获珠的RIP-seq的详细描述。该方法可用于评估pri-miRNA与拟南芥中的切割复合物的结合,并且它可以应用于植物中的其他RNA结合蛋白。

Implementation of Blue Light Switchable Bacterial Adhesion for Design of Biofilms
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract]  Control of bacterial adhesions to a substrate with high precision in space and time is important to form a well-defined biofilm. Here, we present a method to engineer bacteria such that they adhere specifically to substrates under blue light through the photoswitchable proteins nMag and pMag. This provides exquisite spatiotemporal remote control over these interactions. The engineered bacteria express pMag protein on the surface so that they can adhere to substrates with nMag protein immobilization under blue light, and reversibly detach in the dark. This process can be repeatedly turned on ... [摘要]  在空间和时间上高精度地控制细菌粘附到基底对于形成明确的生物膜是重要的。 在这里,我们提出了一种方法来设计细菌,使其在蓝光下通过光可切换蛋白质nMag和pMag特异性地粘附在基底上。 这为这些交互提供了精妙的时空遥控。 工程菌在表面上表达pMag蛋白,以便它们可以在蓝光下与nMag蛋白固定化的基质粘附,并在黑暗中可逆地分离。 该过程可以重复开启和关闭。 此外,通过在细菌表面表达不同的pMag蛋白质并改变光强度可以调节细菌粘附性质。 该协议提供了可高度空间和时间分辨率的细菌粘附的光可切换,可逆和可调控制,这使我们能够以极大的灵活性在基底上图案化细菌。

【背景】控制生物膜形成对于了解细菌在自然发生的生物膜中的社会相互作用至关重要(Flemming et。,2016)。这对生物膜在生物催化,生物传感和废物处理中的生物技术应用也特别重要(Zhou等人,2013; Jensen等人,2016)。生物膜的形成始终始于细菌与底物的粘附,这决定了生物膜中的空间组织(Liu等人,2016; Nadell等人,2016)。已经提出了许多策略来控制细菌粘附,例如通过脂质体融合利用生物正交反应基团修饰细菌表面(Elahipanah等,2016),将粘附分子固定在基质上(Sankaran等,等),2015; Zhang等人,2016; ...

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