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3',5'-Dimethoxy-4'-hydroxyacetophenone

3'',5''-二甲氧基-4''-羟基苯乙酮

公司名称: Sigma-Aldrich
产品编号: D134406
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Transient Expression Assay in NahG Arabidopsis Plants Using Agrobacterium tumefaciens
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract]  Agrobacterium-mediated transient expression has greatly contributed to research in molecular plant biology but has low efficiency and inconsistency in Arabidopsis thaliana (Arabidopsis). Here, we describe a simple, efficient and fast protocol to make transient gene expression in NahG Arabidopsis plants using Agrobacterium tumefaciens. This protocol has been successfully used to assess protein sub-cellular localization and accumulation, enzyme activity, and protein-protein interaction. In addition, this assay overcomes the use of Nicotiana ... [摘要]  农杆菌介导的瞬时表达大大促进了分子植物生物学的研究,但是在拟南芥(Arabidopsis thaliana)( Arabidopsis )中效率低且不一致。 在这里,我们描述了一种简单,高效和快速的方法,用于根据根癌农杆菌在 NahG 拟南芥植物中进行瞬时基因表达。 该方案已成功用于评估蛋白质亚细胞定位和积累,酶活性和蛋白质 - 蛋白质相互作用。 此外,该测定法克服了使用本氏烟草植物作为瞬时基因表达测定的替代系统。 最后,该方案的使用不需要复杂的接种方法或特定的生长条件,并且可以与具有相似结果的不同农杆菌菌株一起使用。

【背景】根癌土壤杆菌(以下简称土壤杆菌)介导的瞬时转化试验已经对分子植物生物学研究作出了重大贡献。这些方法与费时费力的稳定转化方法相比具有许多优点,其中包括在烟草本氏烟中进行瞬时转化测定时更高的效率,简单性和快速,一致的结果。另一方面,当在模式植物拟南芥(以下称为拟南芥)中进行这些测定时,这些测定是无效的并且缺乏稳健性,从而迫使拟南芥研究人员使用 N。本氏烟草作为一种异源系统,这会带来明显的局限性,并可能产生令人误解的结果。

过去已做出许多努力来提高土壤杆菌介导的拟南芥中的瞬时转化的功效(在Krenek等人的综述中,2015年)。 ...

Histone Deubiquitination Assay in Nicotiana benthamiana
Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract]  Histone modifications are a group of post-translational modifications on histones which can alter chromatin structure and affect gene expression. Histone ubiquitination is a histone modification found in particular on histone H2A and H2B. Histone ubiquitination can be reversed by ubiquitin-specific proteases (UBP). Here, we describe an in vivo assay for histone deubiquitination activity. After infiltrating UBP12 into Nicotiana benthamiana leaves, H2Aub was visualized by immunocytochemistry. Nicotiana benthamiana leaves, which show high agro infiltration efficiency, ... [摘要]  组蛋白修饰是一组组蛋白翻译后修饰,可以改变染色质结构并影响基因表达。组蛋白泛素化是组蛋白H2A和H2B特异性发现的组蛋白修饰。泛素特异性蛋白酶(UBP)可以逆转组蛋白泛素化。在这里,我们描述了组蛋白去泛素化活性的体内试验。在将UBP12渗入烟草叶片中后,通过免疫细胞化学观察H2Aub。表现出高的农业渗透效率的本氏烟草叶用于瞬时UBP12表达,用于节省劳力和时间的方案。 H2Aub水平降低表明UBP12的组蛋白去泛素化活性。 N的核的清晰可视化。本生叶使得该方法能够通过使用特异性抗体容易地测量体内组蛋白修饰的水平,从而提供强大的蛋白质功能线索。因此,该协议是组蛋白去泛素化活性的体外试验的有力补充。

【背景】组蛋白修饰在调节染色质结构和基因表达中发挥重要作用。 研究最深入的组蛋白修饰包括甲基化,乙酰化,磷酸化,泛素化和sumoylation。 然而,引入或去除特定组蛋白修饰的酶并不总是已知的。 强大的体外试验可以确定组蛋白修饰酶的催化潜能,但是体内试验方法对于确认体外试验的特异性反映抗体的特异性是必要的。 体内活动。 在这里,我们描述了一个灵活的协议来测试植物组织中组蛋白修饰酶的活性。本塞姆氏。 尽管我们使用该方案来测试遍在蛋白特异性蛋白酶(UBP)对泛素化H2A的活性,但它也可以容易地用于其他特异性抗体可用的组蛋白修饰。

Trimolecular Fluorescence Complementation (TriFC) Assay for Direct Visualization of RNA-Protein Interaction in planta
Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract]  RNA-Protein interactions play important roles in various eukaryotic biological processes. Molecular imaging of subcellular localization of RNA/protein complexes in plants is critical for understanding these interactions. However, methods to image RNA-Protein interactions in living plants have not yet been developed until now. Recently, we have developed a trimolecular fluorescence complementation (TriFC) system for in vivo visualization of RNA-Protein interaction by transient expression in tobacco leaves. In this method, we combined conventional bimolecular fluorescence ... [摘要]  RNA-蛋白质相互作用在各种真核生物过程中起重要作用。 RNA /蛋白质复合物在植物中亚细胞定位的分子成像对于理解这些相互作用至关重要。然而,到目前为止,尚未开发在活植物中形成RNA-蛋白质相互作用的方法。最近,我们开发了一种三分子荧光互补(TriFC)系统,用于在烟草叶中瞬时表达的RNA-蛋白质相互作用的体内可视化。在这种方法中,我们将传统的双分子荧光互补(BiFC)系统与MS2系统(噬菌体MS2外壳蛋白[MCP]及其结合RNA序列[MS2序列])(Schonberger等人,2012)相结合, 。目标RNA用6xMS2标记,MCP和RNA结合蛋白与YFP片段融合。编码这种融合RNA和蛋白质的DNA构建体用土壤杆菌悬浮液渗入烟草叶中。通过共焦显微镜观察体内的RNA-蛋白质相互作用
【背景】近来,多种类型的长非编码RNA(lncRNA)已经被鉴定并显示出在转录调节和染色质修饰中起重要作用(St Laurent等人,2015)。到目前为止,lncRNA介导的功能的大多数分子机制与RNA-蛋白质相互作用密切相关(St ...

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