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Bromophenol Blue sodium salt

溴酚蓝钠盐

公司名称: Sigma-Aldrich
产品编号: B5525
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Analysis of Autophagic Activity Using ATG8 Lipidation Assay in Arabidopsis thaliana
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract]  As a fundamental metabolic pathway to degrade and recycle cellular cargos, autophagy is highly induced upon stress, starvation and senescence conditions in plants. A double-membrane structure named autophagosome will form during this process for cargo sequestration and delivery into the vacuole.

A number of regulators have been characterized in plants, including the autophagy-related (ATG) proteins and other plant-specific proteins. Among them, ATG8 will undergo a lipidation process to become a membrane-bound ATG8-phosphatidylethanolamine form and mark the growing autophagosomal ...
[摘要]  作为降解和回收细胞货物的基本代谢途径,自噬在植物的胁迫,饥饿和衰老条件下被高度诱导。 在这个过程中,将形成一个称为自噬体的双膜结构,用于货物隔离和输送到液泡中。

已经在植物中表征了许多调控因子,包括自噬相关(ATG)蛋白和其他植物特异性蛋白。 其中,ATG8将经历脂化过程以成为膜结合的ATG8-磷脂酰乙醇胺形式并标记日益增长的自噬体膜以及完成的自噬体。 因此,ATG8被认为是自噬体的标志; 并且膜结合形式的ATG8的生物化学检测被用作测量自噬活性的主要方法之一。 在这里,我们描述了使用拟南芥幼苗检测ATG8-PE形式的ATG8脂化测定法。

【背景】自噬是调节受损细胞器的大量降解和不需要的细胞内容物的基本代谢过程。在自噬过程中,称为自噬体的双膜结构将形成并将货物递送到液泡中以降解。自噬相关蛋白(ATG)需要调节自噬活性(Liu and ...

In vitro Analysis of Ubiquitin-like Protein Modification in Archaea
Author:
Date:
2018-05-20
[Abstract]  The ubiquitin-like (Ubl) protein is widely distributed in Archaea and involved in many cellular pathways. A well-established method to reconstitute archaeal Ubl protein conjugation in vitro is important to better understand the process of archaeal Ubl protein modification. This protocol describes the in vitro reconstitution of Ubl protein modification and following analysis of this modification in Haloferax volcanii, a halophilic archaeon serving as the model organism. [摘要]  泛素样(Ubl)蛋白广泛分布于古细菌中并参与许多细胞途径。 为了更好地理解古细菌Ub1蛋白质修饰的过程,重建体外古细菌Ubl蛋白质缀合物的完善方法是很重要的。 该协议描述了Ubl蛋白质修饰的体外重建以及在作为模型生物的嗜盐古细菌Haloferax volcanii 中对这种修饰进行分析。

【背景】泛素(Ub)与靶蛋白共价连接的过程被称为泛素化,其控制真核细胞中大量的细胞过程(Glickman和Ciechanover,2002; Komander和Rape,2012)。遍在蛋白化由一系列酶(包括Ub激活酶(E1),Ub结合酶(E2s)和Ub连接酶(E3s))催化。泛素化的体外重建是确定酶之间或E3与蛋白质底物之间特异性的有用测定法(Zhao等人,2012)。在古细菌中,Ubl蛋白SAMP采用Ub折叠,并且与E1样酶UbaA催化的蛋白靶标异肽连接[Maupin-Furlow,(2014)综述]。尽管E1同系物在古细菌中广泛存在,但基于一级序列比较,在大多数古细菌中未预测经典E2或E3酶。我们最近对Haloferax volcanii的研究表明甲硫氨酸亚砜还原酶A(MsrA)是Ubl蛋白质修饰(sampylation)与UbaA一起在体内温和的氧化条件下和< (体外)(fu="">

Chromatin Immunoprecipitation Experiments from Whole Drosophila Embryos or Larval Imaginal Discs
Author:
Date:
2017-06-05
[Abstract]  Chromatin Immunoprecipitation coupled either to qPCR (qChIP) or high-throughput sequencing (ChIP-Seq) has been extensively used in the last decades to identify the DNA binding sites of transcription factors or the localization of various histone marks along the genome. The ChIP experiment generally includes 7 steps: collection of biological samples (A), cross-linking proteins to DNA (B), chromatin isolation and fragmentation by sonication (C), sonication test (D), immunoprecipitation with antibodies against the protein or the histone mark of interest (E), DNA recovery (E), identification of ... [摘要]  与qPCR(qChIP)或高通量测序(ChIP-Seq)相结合的染色质免疫沉淀已被广泛用于识别转录因子的DNA结合位点或基因组中各种组蛋白标记的定位。 ChIP实验通常包括7个步骤:收集生物样品(A),交联蛋白质到DNA(B),染色质分离和通过超声处理分离(C),超声处理测试(D),用针对蛋白质的抗体进行免疫沉淀感兴趣的组蛋白标记(E),DNA回收(E),通过PCR或测序鉴定因子相关DNA序列(F)。这里描述的协议可以容易地用于ChIP-seq和ChIP-qPCR实验。描述在完整的果蝇组织中优化分析的实验设置条件的整个过程可以在四天内完成。

背景 尽管永生化的培养细胞广泛用于研究各种细胞类型的染色质景观,但是在生理条件下在体内探测相互作用的有价值的方法对于进行转录的时间或空间比较分析是必要的因子和组蛋白修饰图在不同阶段的果蝇发展或不同组织之间。在这里,我们提供了一个详细的ChIP协议,已被优化,以便在整个果蝇胚胎和幼虫成像光盘上工作,突出关键的实验参数。

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