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Glycerol

甘油

公司名称: Sigma-Aldrich
产品编号: G7757
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Company-protocol()
Other protocol()

Cell-free Reconstitution of the Packaging of Cargo Proteins into Vesicles at the trans Golgi Network
Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract]  Protein sorting at the trans Golgi network (TGN) plays important roles in targeting newly synthesized proteins to their specific destinations. The aim of this proposal is to reconstitute the packaging of non-Golgi resident cargo proteins into vesicles at the TGN, utilizing rat liver cytosol, semi-intact mammalian cells and nucleotides. The protocol describes how to perform the vesicle formation assay, how to isolate vesicles and how to detect cargo proteins in vesicles. This reconstitution assay can be used to quantitatively measure the efficiency of the packaging of a specific cargo ... [摘要]  [摘要] 反式高尔基体网络(TGN)上的蛋白质分选在将新合成的蛋白质靶向其特定目的地方面起着重要作用。该提议的目的是利用大鼠肝细胞溶质,半完整的哺乳动物细胞和核苷酸,在TGN处将非高尔基驻留的货物蛋白重新包装成囊泡。该协议描述了如何进行囊泡形成测定,如何分离囊泡以及如何检测囊泡中的货物蛋白。该重构测定法可用于定量测量在特定实验条件下将特定货物蛋白包装到TGN的运输小泡中的效率。

[背景] 的反式高尔基体网络(TGN)是在分泌运送路径的必要的交通枢纽。为了确保水泡运输的保真度,真核细胞利用各种蛋白质分选设备将特定的货物蛋白质准确地包装到TGN的运输小泡中,然后运至特定的目的地(Guo 等人,2014)。为了加深我们对TGN分选过程特异性的理解,重要的是开发一种能够忠实地重构TGN囊泡形成和货物分选过程的分析方法。该测定法可用于直接和定量地测量特定因子在调节特定货物蛋白包装到运输小泡中的作用。从内质网(ER)将货物蛋白包装到COPII囊泡中的无细胞重构已得到很好的建立(Kim 等,2005; Kim 等,2007; Merte 等,2010; Yuan 等。,2018;Niu 等,2019;)。已经开发出一种体外测定法,其在TGN处重构特定货物蛋白TGN46在运输小泡中的释放(Ponnambalam 等,1996;Wakana ...

Expression, Purification and Crystallization of Recombinant Arabidopsis Monogalactosyldiacylglycerol Synthase (MGD1)
Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract]  In plant cells, galactolipids are predominant, representing up to 50% of the lipid content in photosynthetic tissues. Galactolipid synthesis is initiated by MGDG synthases (MGDs), which use UDP-galactose as a donor sugar and diacylglycerol (DAG) as acceptor, to form monogalactosyldiacylglycerol (MGDG). This protocol is used to produce a recombinant form of Arabidopsis thaliana (A. thaliana) monogalactosyldiacylglycerol synthase 1 (MGD1) protein, in Escherichia coli (E. coli), using a two-step chromatographic purification procedure. The protein is easily ... [摘要]  在植物细胞中,半乳糖脂是主要的,代表高达光合组织脂质含量的50%。通过使用UDP-半乳糖作为供体糖和二酰基甘油(DAG)作为受体的MGDG合成酶(MGD)启动半乳糖脂合成以形成单糖基二酰基甘油(MGDG)。该方案用于在大肠杆菌中产生拟南芥(Arabidopsis thaliana)(拟南芥)单糖半乳糖二酰基甘油合酶1(MGD1)蛋白的重组形式(大肠杆菌),使用两步色谱纯化方法。蛋白质容易表达和纯化至数量,适用于生物化学和结构研究。还描述了MGD1的结晶。

背景 以前在e中表达植物MGD的尝试。大肠杆菌显示约99%的重组蛋白质积累在包涵体中(Miège等,1999)。开发了使用洗涤剂或体外包涵体折叠方案的细菌膜的溶解,并产生足够的纯和活性级分,足以监测酶的活性,但不进行其结构研究(Nishiyama et ...

Plant Tissue Trypan Blue Staining During Phytopathogen Infection
Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract]  In this protocol plant tissue is stained with trypan blue dye allowing the researcher to visualize cell death. Specifically this method avoids the use of the carcinogen compound chloral hydrate, making this classical method of staining safer and faster than ever. The protocol is applied specifically to detect cell death on Arabidopsis leaves during the course of infection with necrotrophic fungus Botrytis cinerea. [摘要]  在该方案中,植物组织用台盼蓝染料染色,使研究人员可视化细胞死亡。具体来说,这种方法避免了使用致癌物水合氯醛,使得这种经典染色方法的染色比以往更加安全和快速。该方案专门用于在坏死性真菌Botrytis cinerea感染过程中检测拟南芥叶片上的细胞死亡。

【背景】 检测死植物组织的最常见的方法之一是台盼蓝染色(Keogh等人,1980)。该重氮染料也用于组织学和药物中,以通过允许细胞死亡的观察来测量组织存活力(Keogh等人,1980; Cooksey,2014)。涉及台盼蓝染色的大多数微观方法需要长时间的清除步骤,使用水合氯醛(CHL),一种目前使用的小型有机化合物,如实验动物中的致癌物,麻醉剂和止痛剂(Keogh等, 1980年; Lu和Greco,2006; Salmon等人,1995)。 CHL未经美国FDA批准或欧盟EMA在任何医疗指征( http://www.accessdata.fda.gov/ )。只有250mg或50mg的合唱水合物足以分别产生成人或儿科镇静剂,其毒性也在新生儿中测定( http://www.drugs.com ...

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