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2-Mercaptoethanol

2-巯基乙醇

公司名称: Sigma-Aldrich
产品编号: M3148
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Isolation and Culture of Mouse Lung ILC2s
Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract]  Group 2 Innate Lymphoid Cells (ILC2) play an important role in immune responses at barrier surfaces, notably in the lung during airway allergic inflammation or asthma. Several studies have described methods to isolate ILC2s from wild-type naive mice, most of them using cell sorting to obtain a pure population. Here, we describe in detail, a simple, efficient method for isolation and culture of lung mouse ILC2s. Lungs from Rag2-/- mice pretreated with IL-33 are collected and processed into single cell suspensions. Lymphoid cells are then recovered by density gradient ... [摘要]  第2组先天性淋巴细胞(ILC2)在屏障表面,特别是在气道过敏性炎症或哮喘期间的肺中的免疫应答中起重要作用。一些研究已经描述了从野生型幼稚小鼠中分离ILC2的方法,其中大多数使用细胞分选来获得纯种群。在这里,我们详细描述了一种简单有效的肺小鼠ILC2分离和培养方法。收集用IL-33预处理的 Rag2 - / - 小鼠的肺并加工成单细胞悬浮液。然后通过密度梯度分离回收淋巴样细胞。通过耗尽谱系阳性细胞然后阳性选择CD45 + 细胞来选择Lin - CD45 + 细胞。将分离的细胞培养数天导致高度纯化的ILC2群体表达典型的细胞表面标志物(CD90.2,Sca1,CD25,CD127和IL-33R)。这些细胞可在培养物中扩增长达10天,并用于多种离体测定或体内过继转移实验。
【背景】第2组先天性淋巴细胞(ILC2)是组织驻留细胞,其在抗寄生虫先天免疫以及过敏性炎症的发展中起关键作用。它们通过产生大量的2型细胞因子IL-5和IL-13对上皮细胞衍生的细胞因子如白细胞介素-33(IL-33)起反应,后者又诱导嗜酸性粒细胞增多和粘液产生(Cayrol和Girard,2018)。为了更好地表征这些细胞的功能和调节,许多组通过荧光激活细胞分选(FACS)从野生型小鼠(WT)的肺中分选ILC2。由于稳定状态下肺中存在的ILC2数量较少,因此该方法导致纯化细胞的产量较低(每只小鼠1×10 ...

A Method for SUMO Modification of Proteins in vitro
Author:
Date:
2018-10-05
[Abstract]  The Small Ubiquitin-related Modifier (SUMO) is a protein that is post-translationally added to and reversibly removed from other proteins in eukaryotic cells. SUMO and enzymes of the SUMO pathway are well conserved from yeast to humans and SUMO modification regulates a variety of essential cellular processes including transcription, chromatin remodeling, DNA damage repair, and cell cycle progression. One of the challenges in studying SUMO modification in vivo is the relatively low steady-state level of a SUMO-modified protein due in part to the activity of SUMO deconjugating enzymes ... [摘要]  小泛素相关修饰物(SUMO)是一种蛋白质,其翻译后添加到真核细胞中并可逆地从其他蛋白质中去除。 SUMO和SUMO途径的酶从酵母到人类都很保守,SUMO修饰调节了多种基本细胞过程,包括转录,染色质重塑,DNA损伤修复和细胞周期进程。 研究SUMO修饰体内的挑战之一是SUMO修饰蛋白的相对低的稳态水平,部分原因是SUMO去缀合酶(SUMO Isopeptidases或SENPs)的活性。 幸运的是,使用重组SUMO酶可以在体外研究SUMO修饰。 在这里,我们描述了一种灵敏的方法,用于检测目标人类蛋白质的SUMO修饰,使用来自兔网织红细胞和放射性标记的氨基酸的体外转录和翻译系统。
【背景】与其他泛素蛋白家族修饰一样,SUMO修饰通过ATP依赖性酶促级联发生,涉及E1激活酶(人类中的Aos1 / Uba2异二聚体),E2结合酶(Ubc9)和许多E3连接之一的连续活性。酶(Gareau和Lima,2010)。具有SUMO缀合共有位点的蛋白质ΨKxE(Ψ是疏水残基,其后是赖氨酸,任何氨基酸和谷氨酸),可以通过哺乳动物中表达的一种或几种SUMO旁系同源物(包括SUMO1,SUMO2)进行有效修饰。或SUMO3(统称为SUMO2 / 3,因为它们的序列同源性为97%)(Gareau和Lima,2010; Flotho和Melchior,2013)。 ...

Analysis of Autophagic Activity Using ATG8 Lipidation Assay in Arabidopsis thaliana
Author:
Date:
2018-06-20
[Abstract]  As a fundamental metabolic pathway to degrade and recycle cellular cargos, autophagy is highly induced upon stress, starvation and senescence conditions in plants. A double-membrane structure named autophagosome will form during this process for cargo sequestration and delivery into the vacuole.

A number of regulators have been characterized in plants, including the autophagy-related (ATG) proteins and other plant-specific proteins. Among them, ATG8 will undergo a lipidation process to become a membrane-bound ATG8-phosphatidylethanolamine form and mark the growing autophagosomal ...
[摘要]  作为降解和回收细胞货物的基本代谢途径,自噬在植物的胁迫,饥饿和衰老条件下被高度诱导。 在这个过程中,将形成一个称为自噬体的双膜结构,用于货物隔离和输送到液泡中。

已经在植物中表征了许多调控因子,包括自噬相关(ATG)蛋白和其他植物特异性蛋白。 其中,ATG8将经历脂化过程以成为膜结合的ATG8-磷脂酰乙醇胺形式并标记日益增长的自噬体膜以及完成的自噬体。 因此,ATG8被认为是自噬体的标志; 并且膜结合形式的ATG8的生物化学检测被用作测量自噬活性的主要方法之一。 在这里,我们描述了使用拟南芥幼苗检测ATG8-PE形式的ATG8脂化测定法。

【背景】自噬是调节受损细胞器的大量降解和不需要的细胞内容物的基本代谢过程。在自噬过程中,称为自噬体的双膜结构将形成并将货物递送到液泡中以降解。自噬相关蛋白(ATG)需要调节自噬活性(Liu and ...

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