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Penicillin-Streptomycin (10,000 U/mL)

青霉素 - 链霉素(10,000U / mL)

公司名称: Thermo Fisher Scientific
产品编号: 15140122
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Protocol for Notch-ligand Binding Assays Using Dynabeads
Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract]  This protocol describes how to measure interaction between Notch receptors and their ligands by cell-based assay using Dynabeads. We have used the protocol to determine binding capacity between Notch1-transfected HEK293T cells and ligand-coated Dynabeads. Expression of Eogt in Notch1-expressing cells promoted binding toward DLL4-coated beads, but not JAG1-coated beads. The Notch-ligand assay using Dynabeads suggested that Eogt facilitates DLL4-Notch1 interaction (Sawaguchi et al., 2017). [摘要]  该协议描述了如何使用Dynabeads通过基于细胞的测定来测量Notch受体及其配体之间的相互作用。 我们已经使用方案来确定Notch1转染的HEK293T细胞和配体包被的Dynabeads之间的结合能力。 在Notch1表达细胞中表达Eogt 促进了对DLL4包被的珠粒的结合,而不是JAG1包被的珠粒。 使用Dynabeads的Notch-配体测定表明,Eogt 有助于DLL4-Notch1相互作用(Sawaguchi等人,2017)。
【背景】Notch信号通路调节许多类型的细胞事件,如所有后生动物中的增殖,细胞命运测定和细胞分化(Mumm和Kopan,2000)。为了启动Notch信号传导,Notch受体的细胞外结构域与其配体结合,呈现在相对细胞上的Delta样(DLL)配体或Jagged(JAG)配体)。

Notch受体的表皮生长因子(EGF)样结构域对配体结合至关重要,并由包含O-岩藻糖,O-葡萄糖和O-GlcNAc聚糖的特定聚糖修饰(Stanley和Okajima,2010)。这些聚糖中的一些通过调节Notch受体和配体之间的物理相互作用(Moloney等人,2000)用作Notch信号传导途径的调节剂。为了研究O-GlcNAc是否调节Notch-配体相互作用,我们开发了一种基于Dynabeads的Notch-配体结合测定。在该测定中,在HEK293T细胞上表达的Notch受体与用DLL4-Fc或JAG1-Fc包被的Dynabeads蛋白A孵育。与用于其他结合测定法的可溶性配体不同,Notch配体的方向固定在珠上,使得它们表现得像配体表达细胞。因此,检测到的结合表示反式结合而不是顺式结合,当Notch受体及其配体在相同的细胞中表达时发生。该测定表明,通过Eogt ...

In vitro Co-culture of Mesenchymal Stem Cells and Endothelial Colony Forming Cells
Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract]  The discovery of endothelial colony forming cells (ECFCs) with robust self-renewal and de novo vessel formation potentials suggests that ECFCs can be an excellent cell source for cardiovascular diseases treatment through improving neovascularization in the ischemic tissues. However, their engraftment after transplantation resulted to be low. Previous studies showed mesenchymal stem/stromal cells (MSCs) could improve the survival and capillary formation capacity of ECFCs in co-culture systems. In this article, we describe a protocol for in vitro co-culture of MSCs and ECFCs to prime ... [摘要]  发现具有强大自我更新和从头血管形成潜力的内皮细胞集落形成细胞(ECFCs)表明,ECFC可以通过改善缺血组织的新生血管形成,成为心血管疾病治疗的优良细胞来源。 然而,移植后的移植导致了低位移植。 以前的研究显示间充质干/基质细胞(MSC)可以改善共培养系统中ECFCs的存活和毛细管形成能力。 在这篇文章中,我们描述了体外协调MSCs和ECFCs共同培养ECFC以实现更好的移植。
【背景】内皮祖细胞(EPC)被定义为能够通过血管发生过程形成新血管的细胞群。 2004年,Ingram等人鉴定了来自人脐带血的称为“内皮细胞集落形成细胞(ECFC)”的离体培养物中的特异性高度增殖的EPC群体Ingram等人,2004),并且这些细胞最近被宣布代表EPCs(Medina等人,2017)。类似的群体也可以从具有等效血管化潜力和临床相关数量的人类胎盘组织中分离(Patel等人,2013; Shafiee等人,2015) )。因此,ECFC移植已被提出作为缺血性疾病如心肌梗塞或关键性腿部缺血的治疗方法。然而,移植后的ECFCs植入物和血管生成潜力被证明是低的(Shafiee等人,2017; ...

Isolation and Purification of Schwann Cells from Spinal Nerves of Neonatal Rat
Author:
Date:
2017-10-20
[Abstract]  Primary cultured Schwann cells (SCs) are widely used in the investigation of the biology of SC and are important seed cells for neural tissue engineering. Here, we describe a novel protocol for harvesting primary cultured SCs from neonatal Sprague-Dawley (SD) rats. In the present protocol, dissociated SCs are isolated from the spinal nerves of neonatal rats and purified by the treatment of cytosine arabinoside (AraC). [摘要]  原代培养的雪旺氏细胞(SCs)广泛用于SC的生物学研究,是神经组织工程的重要种子细胞。 在这里,我们描述了从新生Sprague-Dawley(SD)大鼠中收获原代培养的SC的新方案。 在本方案中,解离的SCs从新生大鼠的脊神经中分离并通过治疗阿糖胞苷(AraC)进行纯化。
【背景】SC是周围神经系统(PNS)的神经胶质细胞。主要SCs的分离和纯化是研究SC生物学的关键步骤。此外,纯化的原代培养的SC是用于神经组织工程的重要种子细胞。迄今为止,已经基于Brockes(Brockes等人,1979)的方法报道了培养SC的各种方法。通过报道的方法,坐骨神经主要用于SC隔离,因为它们尺寸大并且可以容易地获得。然而,坐骨神经的SC容易被成纤维细胞污染,因为结缔组织难以清除。特别是神经管和神经束是成纤维细胞的主要来源。没有特殊处理,污染的成纤维细胞比SCs快得多,并且将很快成为培养物中主要的细胞。在过去几十年中,已经开发出许多用于从污染成纤维细胞中分离SC的纯化方法。这些纯化方法的细节包括单一或组合的抗有丝分裂处理(Wood,1976),抗体介导的细胞溶解(Brockes等人,1979),免疫选择(Assouline等人,,1983; ...

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