| Analysis of Myosin II Minifilament Orientation at Epithelial Zonula Adherens
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Non-muscle myosin II (NMII) form bipolar filaments, which bind F-actin to exert cellular contractility during physiological processes (Vicente-Manzanares et al., 2009). Using a combinatorial approach to fluorescently label both N- and C-termini of the NMII heavy chain, recent works have demonstrated the ability to visualize NMII bipolar filaments at various subcellular localizations (Ebrahim et al., 2013; Beach et al., 2014). At the zonula adherens (ZA) of epithelia, NMII minifilaments bind the circumferential actin bundles in a pseudo-sarcomeric manner (Ebrahim et ...
[摘要] 非肌肉肌球蛋白II（NMII）形成双极细丝，其在生理过程期间结合F-肌动蛋白以施加细胞收缩（Vicente-Manzanares等人，2009）。使用组合方法荧光标记NMII重链的N末端和C末端，最近的工作已经证明了在各种亚细胞定位下可视化NMII双极细丝的能力（Ebrahim等人，2013; Beach 等。，2014）。在上皮细胞粘附分子（ZA）上，NMII小丝以假性肌节方式结合周围肌动蛋白束（Ebrahim等人，2013），这是维持连接张力和组织完整性所需的构象Ratheesh等人，2012）。通过表达绿色荧光蛋白（GFP）-NMIIA重链并使用NMIIA C-末端特异性抗体对其进行免疫标记，我们能够观察到在Caco-2细胞中与F-肌动蛋白束结合的NMII小丝（Michael等人。，2016），如以前报道的（Ebrahim等人，2013; Beach 等人，2014）。此外，我们设计了FIJI/MATLAB分析模块来量化这些小丝相对于在ZA处的连接F-肌动蛋白的大小，距离和比对。小纤维角度的分散性的测量被证明是与结合处收缩性程度密切相关的有用参数（Michael等人，2016）。
关键词：肌球蛋白II微丝，结构照明显微镜，Adherens连接，肌动蛋白组织
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| Immunofluorescent Staining of Mouse Intestinal Stem Cells
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Author:
Date:
2016-02-20
[Abstract] Immunofluorescent staining of organoids can be performed to visualize molecular markers of cell behavior. For example, cell proliferation marked by incorporation of nucleotide (EdU), or to observe markers of intestinal differentiation including paneth cells, goblet cells, or enterocytes (see Figure 1). In this protocol we detail a method to fix, permeabilize, stain and mount intestinal organoids for analysis by immunofluorescent confocal microscopy.
Figure 1. A schematic depicting a ...
[摘要] 可以进行类器官的免疫荧光染色以显现细胞行为的分子标志物。例如，通过掺入核苷酸（EdU）标记的细胞增殖，或观察肠分化的标志物，包括paneth细胞，杯状细胞或肠细胞（参见图1）。在这个协议中，我们详细的方法来修复，透化，染色和安装肠组织，通过免疫荧光共聚焦显微镜分析。
图1.描绘隐窝 - 绒毛形成类器官的示意图，通过免疫荧光染色观察Paneth细胞。肠器官类生长为含有所有肠的多种分化谱系的隐窝 - 绒毛结构。右：免疫荧光染色可用于显现器官类型中的单个细胞类型。通过染色溶菌酶（"Lyso，"Green）显示paneth细胞，其显示位于隐窝碱基的Paneth细胞。 F-肌动蛋白（红色）显示在上皮的顶端表面的隐窝结构，DAPI（蓝色）揭示细胞核。比例尺为25μm。
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