| Isolation and Analysis of Stromal Cell Populations from Mouse Lymph Nodes
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Our protocol describes a simple procedure for isolating stromal cells from lymph nodes (LN). LN are disrupted then enzymatically digested with collagenase and dispase to produce a single cell suspension that can be stained with fluorescently labelled antibodies and analysed by flow cytometry. This protocol will enable identification of fibroblastic reticular cells (FRC), lymphatic endothelial cells (LEC), blood endothelial cells (BEC) as PNAd+ BEC that form LN high endothelial venules (HEV). This method can be applied to examine LN stromal cell responses during inflammatory events ...
[摘要] 我们的方案描述了从淋巴结（LN）分离基质细胞的简单过程。 LN被破坏，然后用胶原酶和分散酶酶消化以产生可以用荧光标记的抗体染色的单细胞悬浮液并通过流式细胞术分析。 该方案能够识别形成LN高内皮小静脉（HEV）的PNAd + BEC的成纤维细胞网状细胞（FRC），淋巴内皮细胞（LEC），血液内皮细胞（BEC）。 该方法可以用于检测由感染或免疫佐剂诱导的炎症事件期间的LN基质细胞反应，并且在LN中发现大多数白细胞。
【背景】淋巴结（LN）由间充质和内皮基质细胞的复杂网络构成。这些包括成纤维细胞网状细胞（FRCs），淋巴内皮细胞（LECs）和血液内皮细胞（BECs）。这些基质细胞组织了LN的复杂微结构，使得能够支持免疫细胞迁移，体内平衡，耐受性和细胞相互作用，以引发对病原体和肿瘤的免疫应答。我们已经表明，LN基质细胞可以响应于炎症信号而增殖和扩张，并且将免疫细胞募集到伴随感染的LN中（Gregory等，2017）。这些基质细胞也可以显着调节其转录程序以应对感染，从而支持持续的免疫应答。该方案使稳定状态和疾病期间LN的基质细胞亚群可靠地分离。这使得LN基质细胞的表型，功能，遗传或表观遗传学研究揭示了它们如何有助于组织体内平衡和免疫应答。
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| In vivo Efficacy Studies in Cell Line and Patient-derived Xenograft Mouse Models
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] In vivo xenograft models derived from human cancer cells have been a gold standard for evaluating the genetic drivers of cancer and are valuable preclinical models for evaluating the efficacy of cancer therapeutics. Recently, patient-derived tumorgrafts from multiple tumor types have been developed and shown to more accurately recapitulate the molecular and histological heterogeneity of cancer. Here we detail the procedures for developing patient-derived xenograft models from breast cancer tissue, cell-based xenograft models, serial tumor transplantation, tumor measurement, and drug ...
[摘要] 衍生自人类癌细胞的体内异种移植模型已经成为评估癌症遗传学驱动因素的黄金标准，并且是用于评估癌症治疗药物功效的有价值的临床前模型。最近，已经开发了来自多种肿瘤类型的患者衍生的移植物，并且显示出更准确地概括了癌症的分子和组织学异质性。在这里，我们详细介绍了从乳腺癌组织，基于细胞的异种移植模型，连续肿瘤移植，肿瘤测量和药物治疗开发患者衍生异种移植模型的程序。
背景 异种移植模型已经成为研究癌症基因驱动因素和确定癌症治疗药物的潜在功效的有力方法。发现T细胞缺乏的无胸腺裸鼠（nu / nu）小鼠和T细胞和B细胞缺陷型严重联合免疫缺陷（scid / scid）小鼠（Flanagan， 1966; Bosma和Carroll，1991）。由于这些发现，其他免疫受损的小鼠模型已经变得可用，包括重组激活基因2（Rag2）敲除小鼠，非肥胖（NOD） - 小鼠和NOD-scid < il2rgamma（null）小鼠（也称为nsg小鼠）（shinkai等人，1992;="" prochazka等人，1992;="">
＆nbsp;在开发包括注射或植入部位的异种移植模型时，应考虑几个选项。由于生长测量和成像的肿瘤可及性，皮下异种移植物通常用于体内研究;然而，该模型的显着限制是大多数癌细胞缺乏正常的基质微环境。原位异种移植物提供互补的基质微环境;然而，根据原位点，包括更复杂的外科手术，测量肿瘤生长或反应的难度以及啮齿动物基质的限制（Talmadge等人，2007），该途径也存在缺点。许多癌症研究尤其是乳腺癌研究中广泛应用原位异种移植物。注入乳腺脂肪垫是一个相对简单的程序，允许乳腺癌细胞的可见和可测量的生长。尽管乳腺脂肪垫为乳腺癌细胞提供了互补的组织部位，但重要的是注意到人和啮齿动物乳腺基质和激素环境之间存在明显差异。 ...
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| In vitro Differentiation of Murine Innate Lymphoid Cells from Common Lymphoid Progenitor Cells
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Author:
Date:
2016-03-20
[Abstract] Subtypes of innate lymphoid cells (ILC), defined based on their cytokine secretion profiles and transcription factor expression, are important for host protection from pathogens and maintaining tissue homeostasis. ILCs develop from common lymphoid progenitors (CLP) in the bone marrow. Using the methods described here, we have previously shown that loss of the transcriptional regulator TOX (Thymocyte-selection associated HMG-box protein) leads to specific changes in ILC development and differentiation. Here, we describe how to obtain ILCs from in vivo isolated CLP grown in vitro ...
[摘要] 先天淋巴细胞（ILC）的亚型，基于其细胞因子分泌谱和转录因子表达来定义，对于宿主保护免于病原体和维持组织内稳态是重要的。 ILC从骨髓中的普通淋巴祖细胞（CLP）发展而来。 使用本文所述的方法，我们以前显示转录调节器TOX（胸腺细胞选择相关的HMG框蛋白）的损失导致ILC发展和分化的具体变化。 在这里，我们描述了如何从体内分离的CLP获得ILC。
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