| Terminal Deoxynucleotidyl Transferase Mediated Production of Labeled Probes for Single-molecule FISH or RNA Capture
|
|
Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Arrays of short, singly-labeled ssDNA oligonucleotides enable in situ hybridization with single molecule sensitivity and efficient transcript specific RNA capture. Here, we describe a simple, enzymatic protocol that can be carried out using basic laboratory equipment to convert arrays of PCR oligos into smFISH and RAP probesets in a quantitative, cost-efficient and flexible way.
[摘要] 短的，单标记的ssDNA寡核苷酸阵列使得能够与单分子灵敏度和有效的转录物特异性RNA捕获进行原位杂交。 在这里，我们描述了一个简单的酶促协议，可以使用基本的实验室设备将PCR寡核苷酸阵列以定量，成本高效和灵活的方式转换为smFISH和RAP探针组。
【背景】合成来源的多个单标记的短寡核苷酸的使用极大地改进了对特异性转录物的高特异性和单分子灵敏度的检测（Femino等人，1998; Raj等人。，2008）。这种探针分子与经典使用的长核酸探针相比具有改进的穿透性并且需要更温和的杂交条件，从而更好地保存标本的结构（例如，Little等人 >，2015，Gaspar 等，2017a）。由于在该设计中多个寡核苷酸 - 通常24-96-靶向相同转录物的不同部分，因此在非特异性背景上在特异性靶分子上发生信号累积，这与由长的多标记探针产生的相等信号相反（Raj ，2008）。此外，由于单个短探针的标记是定量的 - 与长探针的随机标记相反 - ...
|
|
|
| ER Microsome Preparation and Subsequent IAA Quantification in Maize Coleoptile and Primary Root Tissue
|
|
Author:
Date:
2016-05-05
[Abstract] Auxin is a major growth hormone in plants and the first plant hormone to be discovered and studied (Darwin and Darwin, 1880). The auxin molecule in plants was first identified as indole-3-acetic acid (IAA) by Kögl et al. (1934). Active research over nearly a decade has shed light on many of the molecular mechanisms of its action but the complexity and redundancy of the auxin biosynthetic network raises questions about control of this system. We have shown that some enzymes involved in the YUCCA-route of auxin biosynthesis are not cytosolic but localised to the endoplasmic reticulum ...
[摘要] 生长素是植物中的主要生长激素和待发现和研究的第一种植物激素（Darwin和Darwin，1880）。植物中的植物生长素分子首先由Kögl等人确定为吲哚-3-乙酸（IAA）。 （1934）。近十年的积极研究揭示了其作用的许多分子机制，但是生长素生物合成网络的复杂性和冗余性提出了对该系统的控制的问题。我们已经显示，参与植物生长素生物合成的YUCCA途径的一些酶不是细胞质的，而是定位于拟南芥中的内质网（ER）（YUCCA4.2）（Kriechbaumer等人。（ Zm TAR1和 Zm SPI）（Kriechbaumer /em>，2015）。这提高了生长素生物合成的亚细胞区室的有趣的可能性。为了显示玉米生长素生物合成确实可以在来自玉米幼苗的微粒体以及胞质细胞部分中发生，我们应用本文所述的方案：从玉米胚芽鞘和原代根组织分离微粒体，使用色氨酸的微粒体和胞浆部分的酶测定（Trp）或吲哚-3-丙酮酸（IPyA）作为底物，并提取并定量生长素IAA。
|
|
|