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Date:
2016-05-20
[Abstract] Protein-protein interaction experiments, such as co-immunoprecipitation (IP) assays, classically require tremendous amount of cells. This becomes a problem when your work focuses on rare cell populations (e.g., lymphocyte subtypes). O-link Bioscience has developed Proximity Ligation Assay (PLA) reagents and procedures to alleviate and solve this kind of issue. Moreover PLA experiments are read out using fluorescence or bright field microscopy, providing additional information on intracellular interactions localization significantly bettering classical IP procedures.
PLA ...
[摘要] 蛋白质 - 蛋白质相互作用实验，例如共免疫沉淀（IP）测定，经典地需要大量的细胞。当您的工作关注稀有细胞群体（例如淋巴细胞亚型）时，这成为一个问题。 O-link Bioscience开发了邻近连接测定（PLA）试剂和程序以缓解和解决这类问题。此外，使用荧光或明视场显微镜读出PLA实验，提供关于细胞内相互作用定位的额外信息，显着改善经典IP程序。 PLA试剂由互补的小寡核苷酸"负"和"正"探针组成，其特异性识别来自靶向您感兴趣的两种蛋白质的一抗（Abs）的宿主物种。实验必须使用来自不同物种，小鼠或山羊）作为PLA探针"减"或"加"对一抗的特定宿主物种（例如，"加"抗兔与"减"抗鼠或"加" "如果使用小鼠和兔初级Abs，则允许使用"减"抗兔组合的抗小鼠）。当两种PLA探针足够接近（40nm）时，在连接酶孵育后发生连接，产生环DNA。接下来，由于在该步骤中掺入的聚合酶和互补荧光核苷酸，这些形成环的DNA被扩增。每个发光点此后被认为是两种蛋白质之间的相互作用位点（图1）。
图1. Duolink ®实验的示意图。 ...
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