| Proximity Ligation Assay (PLA) Protocol Using Duolink® for T Cells
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Author:
Date:
2016-05-20
[Abstract] Protein-protein interaction experiments, such as co-immunoprecipitation (IP) assays, classically require tremendous amount of cells. This becomes a problem when your work focuses on rare cell populations (e.g., lymphocyte subtypes). O-link Bioscience has developed Proximity Ligation Assay (PLA) reagents and procedures to alleviate and solve this kind of issue. Moreover PLA experiments are read out using fluorescence or bright field microscopy, providing additional information on intracellular interactions localization significantly bettering classical IP procedures.
PLA ...
[摘要] 蛋白质 - 蛋白质相互作用实验，例如共免疫沉淀（IP）测定，经典地需要大量的细胞。当您的工作关注稀有细胞群体（例如淋巴细胞亚型）时，这成为一个问题。 O-link Bioscience开发了邻近连接测定（PLA）试剂和程序以缓解和解决这类问题。此外，使用荧光或明视场显微镜读出PLA实验，提供关于细胞内相互作用定位的额外信息，显着改善经典IP程序。 PLA试剂由互补的小寡核苷酸"负"和"正"探针组成，其特异性识别来自靶向您感兴趣的两种蛋白质的一抗（Abs）的宿主物种。实验必须使用来自不同物种，小鼠或山羊）作为PLA探针"减"或"加"对一抗的特定宿主物种（例如，"加"抗兔与"减"抗鼠或"加" "如果使用小鼠和兔初级Abs，则允许使用"减"抗兔组合的抗小鼠）。当两种PLA探针足够接近（40nm）时，在连接酶孵育后发生连接，产生环DNA。接下来，由于在该步骤中掺入的聚合酶和互补荧光核苷酸，这些形成环的DNA被扩增。每个发光点此后被认为是两种蛋白质之间的相互作用位点（图1）。
图1. Duolink ®实验的示意图。 ...
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| Proximity Ligation Assay (PLA) to Detect Protein-protein Interactions in Breast Cancer Cells
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Author:
Date:
2015-05-20
[Abstract] Protein-protein interaction networks provide a global picture of cellular function and biological processes, and the dysfunction of some interactions causes many diseases, including cancer. The in situ proximity ligation assay (PLA) is a powerful technology capable of detecting the interactions among proteins in fixed tissue and cell samples. The interaction between two proteins is detected using the corresponding two primary antibodies raised in different species. Species-specific secondary antibodies (PLA probes), each with a unique short DNA strand attached to it, bind to the ...
[摘要] 蛋白质 - 蛋白质相互作用网络提供细胞功能和生物过程的全局图像，并且一些相互作用的功能障碍引起许多疾病，包括癌症。原位接近连接测定（PLA）是一种能够检测固定组织和细胞样品中蛋白质之间相互作用的强大技术。使用在不同物种中产生的相应的两种一抗来检测两种蛋白质之间的相互作用。物种特异性二抗（PLA探针），每个具有连接到其的独特的短DNA链，结合一抗。当PLA探针非常接近（<40nm）时，DNA链可以通过随后添加两个其它形成环的DNA寡核苷酸相互作用。 DNA环的几百倍复制可以在扩增反应之后发生，并且通过标记的互补寡核苷酸探针产生荧光信号。因此，每个检测到的信号被可视化为单个荧光点，其可以基于显微镜图像被量化并分配到特定的亚细胞位置。这种革命性的技术使我们能够与其他传统方法，如共免疫沉淀（Co-IP）相比，以高特异性和灵敏度研究蛋白质复合物形成。
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