| Real-time Base Excision Repair Assay to Measure the Activity of the 8-oxoguanine DNA Glycosylase 1 in Isolated Mitochondria of Human Skin Fibroblasts
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Author:
Date:
2021-03-20
[Abstract] 7,8-dihydro-8-oxoguanine (8-oxoG) is one of the most common and mutagenic oxidative DNA damages induced by reactive oxygen species (ROS). Since ROS is mainly produced in the inner membranes of the mitochondria, these organelles and especially the mitochondrial DNA (mtDNA) contained therein are particularly affected by this damage. Insufficient elimination of 8-oxoG can lead to mutations and thus to severe mitochondrial dysfunctions. To eliminate 8-oxoG, the human body uses the enzyme 8-oxoguanine DNA glycosylase 1 (OGG1), which is the main antagonist to oxidative damage to DNA. However, ...
[摘要] [摘要] 7,8-二氢-8-氧鸟嘌呤（8-oxoG）是由活性氧（ROS）引起的最常见且诱变的氧化DN A损伤之一。由于ROS主要在线粒体的内膜中产生，因此这些细胞器，特别是其中所含的线粒体DNA（mtDNA）受到这种损害的特别影响。消除8-oxoG可能会导致突变，从而导致严重的线粒体功能障碍。为了消除8-oxoG，人体使用了8-氧代鸟嘌呤DNA糖基化酶1（OGG1），它是DNA氧化损伤的主要拮抗剂。但是，先前的研究表明，人类OGG1的活性（h OGG1）随着年龄的增长而减少，导致与年龄相关的8-oxoG积累。更好地了解hOGG1的确切机制可能会导致发现新的靶标，因此对于开发预防性疗法具有重要意义。因此，我们开发了一种实时碱基切除修复测定法，该测定法采用了专门设计的双链报告寡核苷酸来测量分离的线粒体裂解物中hOGG1的活性。这里介绍的该系统与经典测定法不同，在经典测定法中，可以通过实时测量hOGG1活性通过变性丙烯酰胺凝胶进行终点测定。另外，为了确定该双功能酶的每个酶促步骤的活性（N-糖基化酶和AP-裂解酶活性），还可以进行解链曲线分析。使用各种离心步骤从人成纤维细胞中分离线粒体后，将其裂解，然后与专门设计的报告寡核苷酸一起孵育。hOGG1活性的后续测量是在常规实时PCR系统中进行的。
[背景]人体是永久的损害案例。每天约10 ...
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| Platelet Migration and Bacterial Trapping Assay under Flow
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Author:
Date:
2018-09-20
[Abstract] Blood platelets are critical for hemostasis and thrombosis, but also play diverse roles during immune responses. We have recently reported that platelets migrate at sites of infection in vitro and in vivo. Importantly, platelets use their ability to migrate to collect and bundle fibrin (ogen)-bound bacteria accomplishing efficient intravascular bacterial trapping. Here, we describe a method that allows analyzing platelet migration in vitro, focusing on their ability to collect bacteria and trap bacteria under flow.
[摘要] 血小板对于止血和血栓形成至关重要，但在免疫反应中也起着不同的作用。 我们最近报道了血小板在体外体外和体内感染部位迁移。 重要的是，血小板利用它们迁移的能力来收集和捆绑纤维蛋白（ogen）结合的细菌，从而实现有效的血管内细菌捕获。 在这里，我们描述了一种方法，允许分析血小板在体外的迁移，重点是它们收集细菌和捕获流动细菌的能力。
【背景】血小板是从巨核细胞释放的小的无核细胞片段，其存在于哺乳动物生物的骨髓内（Machlus和Italiano，2013）。大约7500亿血小板在人体血液中循环，不断扫描脉管系统以破坏内皮表面。在遇到内皮损伤时，血小板立即被招募在充分表征的事件级联中，包括初始血小板束缚和滚动，然后是血小板活化，粘附和扩散，最终导致纤维蛋白（ogen）依赖性聚集和随后的血栓收缩（Jackson， 2007）。血小板栓塞形成是生理性止血的主要步骤，但也是动脉粥样硬化斑块破裂后的病理性血栓形成，触发心肌梗塞或中风（Jackson，2011）。
除了在止血和血栓形成中的公认作用外，血小板还发展出多种免疫功能（Semple et al。，2011）。作为第一批招募炎症和感染部位的细胞，血小板在启动血管内免疫反应中起着重要作用（Wong et ...
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| Extraction and Quantification of Sphingosine 1-Phosphate (S1P)
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Author:
Date:
2016-05-20
[Abstract] Sphingosine 1-phosphate (S1P) is a lipid metabolite and signaling molecule involved in many different physiological processes including lymphocyte circulation, T cell differentiation, antigen presentation, and maintenance of the vascular endothelial barrier. S1P is a ligand of five different G protein-coupled cell surface receptors designated S1P1-5. It has also been described as an intracellular second messenger. Quantification of S1P in biological samples is therefore an important task to decipher its signaling capabilities in vivo under physiological and ...
[摘要] 鞘氨醇1-磷酸（S1P）是参与许多不同生理过程的脂质代谢物和信号分子，所述生理过程包括淋巴细胞循环，T细胞分化，抗原呈递和血管内皮屏障的维持。 S1P是称为S1P 1-5的五种不同的G蛋白偶联的细胞表面受体的配体。 它也被描述为细胞内第二信使。 因此，生物样品中S1P的定量是在不同体液和器官中的生理和病理生理条件下破译其体内信号传导能力的重要任务。 在该方案中，通过耦合到三重四极杆质谱（LC-MS/MS）的液相色谱法进行S1P的定量。
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