| Determination of the Cellular Ion Concentration in Saccharomyces cerevisiae Using ICP-AES
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Author:
Date:
2020-08-20
[Abstract] The yeast Saccharomyces cerevisiae has been perceived over decades as a highly valuable model organism for the investigation of ion homeostasis. Indeed, many of the genes and biological systems that function in yeast ion homeostasis are conserved throughout unicellular eukaryotes to humans. In this context, measurement of the yeast cellular ionic content provides information regarding yeast response to gene deletion or exposure to chemicals for instance. We propose here a protocol that we tested for the analysis of 12 elements (Ba2+, Ca2+, Cd2+, Co2+ ...
[摘要] [摘要] 酵母酿酒酵母已被感知了几十年，作为离子稳态的调查一个非常有价值的模型生物。实际上，在整个酵母的单细胞真核生物中，在酵母离子稳态中起作用的许多基因和生物系统都是保守的。在这种情况下，酵母细胞离子含量的测量提供了有关酵母对例如基因缺失或暴露于化学物质的反应的信息。我们在这里提出一种测试过的协议，用于分析12种元素（Ba 2 + ，Ca 2 + ，Cd 2 + ，Co 2 + ，Cu 2 + ，Fe 2 + ，K 2 + ，Mg 电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP-AES）测定酵母中的2 + ，Mn 2 + ，Na + ，Ni 2 + ，Zn 2+ ）。这项技术能够确定一个生物样品中许多离子的细胞含量。
[背景 ] 酵母已被广泛用于研究基因缺失，细胞外环境的修改，或异源蛋白的生产，例如后的离子响应。在这种情况下，具有监测酵母细胞离子状态的方法是非常重要的。ICP-AES使用来自惰性气体（如氩气）的高能等离子体非常快速地燃烧分析物。从分析物发出的颜色表示存在的元素，光谱信号的强度表示这些元素的浓度。与其他技术（例如分光光度法，原子吸收光谱法和原子荧光光谱法）相比，ICP-AES是一种多离子分析方法，涉及简单且快速的过程，且检测限相对较低（Dahlquist和Knoll，1978年）。此处描述的方法适用于Ba 2 + ，Ca 2 + ，Cd 2 + ...
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| Lysosomal Amino Acid Efflux Assay
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Author:
Date:
2014-02-20
[Abstract] As the cellular “recycling” organelle, lysosomes break down proteins into amino acids, which are then transported into cytosol for reuse by various amino acid transporters. The transport rate of an amino acid is presumably regulated by cellular conditions such as organelle pH, membrane potential and metabolic states. Because of their intracellular localization and the relative inaccessibility, lysosomal amino acid transporters have been studied largely via indirect measurements. Using lysosome purification and 14C-labeled amino acids, this protocol provides a method to measure the ...
[摘要] 作为细胞"再循环"细胞器，溶酶体将蛋白质分解成氨基酸，然后将其转运到细胞质中以供各种氨基酸转运蛋白重复使用。 氨基酸的转运速率可能通过细胞条件如细胞器pH，膜电位和代谢状态来调节。 由于它们的细胞内定位和相对不可接近性，溶酶体氨基酸转运蛋白主要通过间接测量进行研究。 使用溶酶体纯化和14 C标记的氨基酸，该协议提供了一种测量特定氨基酸转运蛋白在溶酶体上的效率的方法。
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