| Detecting Spaciotemporal Transcript Accumulation in Maize by RNA In Situ Hybridization
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] RNA in situ hybridization is a method for visualizing spatiotemporal transcript accumulation in cells and tissues. The method provides clear resolution, is highly sensitive and specific, and can uncover gradients of transcript accumulation within a histologically-intact tissue, which is not possible currently with other methods for transcript detection. RNA in situ hybridization, however, is not a quantitative approach for gene expression. Protocols for RNA in situ hybridization have numerous steps that can span several days of work, complicating troubleshooting ...
[摘要] [摘要] RNA原位杂交是一种可视化时空转录本在细胞和组织中积累的方法。该方法提供清晰的分辨率，高度灵敏和特异，并且可以揭示组织完整的组织内转录物积累的梯度，这是当前其他方法无法检测到转录物的方法。然而，RNA原位杂交不是用于基因表达的定量方法。RNA原位杂交的协议有许多步骤，可能需要花费数天的时间，从而使故障排除过程变得更加复杂。在这里，我们基于先前发布的RNA原位构建 杂交方案针对石蜡包埋和切片的玉米组织进行了优化（Jackson，1991； Long等，1996；Javelle等，2011），它提供了优化转录本检测的其他措施。
图形摘要：
RNA原位杂交的工作流程
[背景技术]在时间和空间差异基因表达允许具有相同的遗传物质的细胞呈现不同的身份。确实，基因表达的这种变化通常负责驱动整个生物体中模式或形态的进化变化（Carroll，2005）。因此，通过观察组织内天然背景下的基因表达，可以增强对发育过程的见识。诸如RT-qPCR和RNA- ...
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| Acetyl-coenzyme A Synthetase (Acs) Assay
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Author:
Date:
2012-09-05
[Abstract] Acetyl-coenzyme A synthethase (Acs, E.C.6.2.1.1) is an acetate activating enzyme widely represented in nature from bacteria to human. Its function is important for cellular catabolism, especially in order to support microbial growth at low concentrations of acetate (<10 mm)="" (castano="" cerezo="">et al., 2011; Castano Cerezo et al., 2009；Renilla et al., 2012). In this protocol, a continuous coupled enzymatic assay for Acs activity is described. Product formation is followed spectrophotometrically by the formation of NADH. The protocol is tailored for E. coli ...
[摘要] 乙酰辅酶A合成酶（Acs，E.C.6.2.1.1）是从细菌到人广泛代表的乙酸活化酶。其功能对于细胞分解代谢是重要的，特别是为了支持在低浓度的乙酸盐（<10mm）下的微生物生长（castano cerezo等人，2011;="" castano="" cerezo等人，="" ，2009;="">
首先由Brown等人描述了乙酰辅酶A合成酶（Acs）测定法 。 （1977）。使用与苹果酸脱氢酶（Mdh）和柠檬酸合酶（Cs）偶联的酶促方法测量Acs活性：乙酸+ AcASH + ATP→乙酰-CoA + AMP（Cs）乙酰 - CoA +草酰乙酸盐→柠檬酸盐+ Co Wash
（Mdh）L-苹果酸盐+ NAD +→草酰乙酸盐+ NADH
净反应：乙酸盐+ ATP + L-苹果酸盐+ NAD +→柠檬酸盐+ AMP + NADH />在测定条件下，Mdh和Cs活性过量，NADH形成速率受Acs活性限制。
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