| An ex vivo Perifusion Method for Quantitative Determination of Neuropeptide Release from Mouse Hypothalamic Explants
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] The hypothalamus is a primary brain area which, in mammals, regulates several physiological functions that are all related to maintaining general homeostasis, by linking the central nervous system (CNS) and the periphery. The hypothalamus itself can be considered an endocrine brain region of some sort as it hosts in its different nuclei several kinds of neuropeptide-producing and -secreting neurons. These neuropeptides have specific roles and participate in the regulation of homeostasis in general, which includes the regulation of energy metabolism, feeding behavior, water intake and body ...
[摘要] 下丘脑是一个主要的脑区域，在哺乳动物中，通过连接中枢神经系统（CNS）和周围环境来调节与维持一般体内平衡有关的几种生理功能。下丘脑本身可以被认为是某种类型的内分泌大脑区域，因为它在其不同的核中存在几种神经肽产生和分泌神经元。这些神经肽具有特定的作用并参与一般的体内平衡调节，其中包括调节能量代谢，摄食行为，进水量和身体核心温度。
如前所述，为了发挥其效果，必须产生这些肽，而且大部分是分泌的。在这种情况下，能够评估某些病症，疾病或治疗如何能够真正影响神经肽的分泌以及不同的神经肽能电路的功能是非常重要的。
评估这一点的一种方法是下丘脑外植体的渗透，然后定量收集的部分中的肽。
在这里，我们逐步解释如何在体外渗出下丘脑外植体中收集分数，其中可以从这些活的分离组织定量测定神经肽/神经激素释放。下丘脑渗出与其他现有测定相比有两大优点：（1）允许药理学操作来解剖下丘脑外植体中不同神经肽/神经激素释放的信号传导机制，以及（2）允许在多种下丘脑制剂上同时进行不同条件的实验，（3）据我们所知，这是允许研究神经肽分泌在基础条件下和用同样的下丘脑外植体反复刺激的唯一方法。
【背景】已经经常使用渗透研究胰岛功能。然而，该测定原则上适用于任何内分泌组织和任何肽或蛋白质分泌。
事实上，过去已经使用了不同的渗透系统，并且仍然是不同研究实验室在各种条件下研究下丘脑神经肽释放的有效程序。例如，Callewaere及其同事在2006年发表了一项研究，分析了趋化因子SDF-1（基质细胞衍生因子-1）对血管舒张素诱导的AVP（精氨酸 ...
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| Active Cdk5 Immunoprecipitation and Kinase Assay
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Cdk5 activity is regulated by the amounts of two activator proteins, p35 and p39 (Tsai et al., 1994; Zheng et al., 1998; Humbert et al., 2000). The p35-Cdk5 and p39-Cdk5 complexes have differing sensitivity to salt and detergent concentrations (Hisanaga and Saito, 2003; Sato et al., 2007; Yamada et al., 2007; Asada et al., 2008). Cdk5 activation can be directly measured by immunoprecipitation of Cdk5 with its bound activator, followed by a Cdk5 kinase assay. In this protocol, buffers for cell lysis and immunoprecipitation are intended to ...
[摘要] Cdk5活性受两种激活蛋白p35和p39（Tsai et al。，1994; Zheng et al。，1998; Humbert等人）的量的调节，2000）。 p35-Cdk5和p39-Cdk5复合物对盐和洗涤剂浓度的敏感性不同（Hisanaga和Saito，2003; Sato et al。，2007; Yamada等人， 2007; Asada 等人，2008）。 Cdk5激活可以通过Cdk5与其结合的激活剂的免疫沉淀直接测量，随后进行Cdk5激酶测定。在该方案中，用于细胞裂解和免疫沉淀的缓冲液旨在保持p35-和p39-Cdk5复合物以评估总Cdk5活性。裂解细胞，并在核后上清液中测定蛋白浓度。 Cdk5在实验组之间从等量的总蛋白免疫沉淀。然后进行洗涤以除去外来蛋白质并平衡激酶缓冲液中的Cdk5-活化剂复合物。然后将Cdk5与组蛋白H1孵育，组蛋白H1是Cdk5和[γ- 32 P] ATP在体外成功建立的靶标。反应通过SDS-PAGE解析并转移到膜上，用于可视化H1磷酸化和免疫沉淀的Cdk5水平的免疫印迹。我们已经使用该测定来建立p39作为少突神经胶质谱系中Cdk5的主要活化剂。然而，该测定法适用于对裂解条件进行适当调整的其它细胞谱系或组织。
【背景】虽然Cdk5通常与神经元功能相关，但最近的工作已经证明Cdk5也可以调节少突胶质细胞祖细胞（OPC）的发育（Tang等人，1998; ...
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| Sphere Formation (Osteosphere/Sarcopshere) Assay
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Author:
Date:
2012-12-20
[Abstract] Self-renewing cells from adult tissue (such as bone) that represent a progenitor population can be grown in suspension cultures in the presence of defined serum-free medium. Progenitor cells can be identified by this property of anchorage-independent growth in suspension cultures. These spherical clusters of progenitor bone cells growing under non-adherent conditions are called osteospheres. Such progenitor populations often possess characteristics of multipotency and can differentiate into multiple mesenchymal lineages. Cancer cells capable of growing in suspension have also been reported in ...
[摘要] 该实验方案的中文版正在准备中．．．
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