| Determination of Polyhydroxybutyrate (PHB) Content in Ralstonia eutropha Using Gas Chromatography and Nile Red Staining
|
|
Author:
Date:
2018-03-05
[Abstract] Ralstonia eutropha H16 produces and mobilizes (re-utilizes) intracellular polyhydroxybutyrate (PHB) granules during growth. This protocol describes the visualization of intracellular Nile red stained PHB granules and the quantification of PHB by gas chromatography. Our first method describes how to analyze PHB granules by fluorescence microscopy qualitatively. Our second approach enables the conversion of PHB to volatile hydroxycarboxylic acid methyl esters by acidic methanolysis and their quantification by gas chromatography. Through this method, it is possible to obtain an absolute ...
[摘要] 在生长过程中，富养罗尔斯通氏菌H16产生和动员（重新利用）细胞内聚羟基丁酸酯（PHB）颗粒。 该协议描述了细胞内尼罗红染色的PHB颗粒的可视化和通过气相色谱定量PHB。 我们的第一种方法描述了如何通过荧光显微镜定性分析PHB颗粒。 我们的第二种方法可以通过酸性甲醇分解和气相色谱定量法将PHB转化为挥发性羟基羧酸甲酯。 通过该方法，可以获得PHB的绝对定量，例如，每细胞干重。
【背景】聚羟基脂肪酸酯（PHA），尤其是聚羟基丁酸酯（PHB），是许多原核生物物种中的能量和碳储存化合物，确保细菌在压力条件下存活（Anderson和Dawes，1990;Pötter和Steinbüchel，2006; Jendrossek和Pfeiffer，2014; Bresan， >等。，2016）。这些生物聚合物的工业应用是生物降解塑料的生产（Chen，2009; Riedel等人，2015）和潜在药物成分的研究（Wu，2009; Zonari等人， ，2015; Pacheco et al。，2015; Giretova ...
|
|
|
| Monoclonal Antibody Purification (Nicotiana benthamiana Plants)
|
|
Author:
Date:
2014-01-20
[Abstract] Plant-based expression systems provide an alternative biomanufacturing platform for recombinant proteins (Matoba et al., 2011). In particular, plant virus-based vectors can overexpress proteins within days in the leaf tissue of Nicotiana benthamiana (N. benthamiana). To overcome the issues of genetic instability and limited infectivity of recombinant viruses, Agrobacterium-mediated delivery of “deconstructed” virus vectors has become the mainstay for the production of large and/or multicomponent proteins, such as immunoglobulin (Ig)G monoclonal antibodies ...
[摘要] 基于植物的表达系统为重组蛋白提供了替代的生物制造平台（Matoba等人，2011）。特别地，基于植物病毒的载体可以在烟草（Nicotiana benthamiana）（本塞姆氏烟草）的叶组织中天数内过表达蛋白质。为了克服重组病毒的遗传不稳定性和有限的感染性的问题，土壤杆菌介导的"解构的"病毒载体的递送已经成为生产大和/或多组分蛋白如免疫球蛋白的主要方法Ig）G单克隆抗体（mAb）。在这里，我们描述了在N中产生人IgG mAbs的方法。本生烟草使用烟草花叶病毒复制子载体magnICON 。载体在7天内可以表达高达几百mg的mAb/kg叶材料。显示了分别用于广泛中和的抗HIV和抗流感mAbs VRC01和CR6261的代表性病例（Hamorsky等人，2013）。叶组织匀浆，通过过滤和离心澄清提取物。 mAb通过快速蛋白质液相色谱（FPLC）使用蛋白A亲和力和Phenyl HP疏水界面树脂纯化。
|
|
|