| Lentiviral Knockdown of Transcription Factor STAT1 in Peromyscus leucopus to Assess Its Role in the Restriction of Tick-borne Flaviviruses
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Author:
Date:
2017-12-05
[Abstract] Cellular infection with tick-borne flaviviruses (TBFVs) results in activation of the interferon (IFN) signaling pathway and subsequent upregulation of numerous genes termed IFN stimulated genes (ISGs) (Schoggins et al., 2011). Many ISGs function to prevent virus pathogenesis by acting in a broad or specific manner through protein-protein interactions (Duggal and Emerman, 2012). The potency of the IFN signaling response determines the outcome of TBFV infection (Best, 2017; Carletti et al., 2017). Interestingly, data from our lab show that TBFV replication is significantly ...
[摘要] 蜱传黄热病病毒（TBFV）的细胞感染导致干扰素（IFN）信号传导途径的激活和随后称为IFN刺激基因（ISG）（Schoggins等人，2011）的众多基因的上调。许多ISG通过蛋白质 - 蛋白质相互作用以广泛或特定的方式起作用来防止病毒发病（Duggal和Emerman，2012）。 IFN信号反应的效力决定了TBFV感染的结果（Best，2016; Carletti等人，2017）。有趣的是，我们实验室的数据显示TBFV复制在储库物种Peromyscus leucopus的细胞中显着受到限制，从而表明有效的抗病毒应答（Izuogu等人，2017）。我们评估干扰素信号对抗性的相对贡献。通过敲低IFN反应途径中的主要转录因子来抑制白血病。信号转导和转录激活因子1（STAT1）是专门针对在P。 leucopus细胞通过shRNA技术。我们进一步测试了基因敲低对细胞对IFN反应和限制病毒复制的能力的影响;结果表明当STAT1表达被改变时，leucopus细胞对IFN刺激的反应降低，并且对TBFV复制显着更敏感。
【背景】IFN信号是抵抗侵入宿主细胞的黄病毒的第一道防线（Robertson等人，2009; Lazear和Diamond，2015）。通过模式识别受体（PRR）检测与病毒颗粒相关的分子标记，然后通过转录因子引发下游信号从细胞释放1型IFN（Kawai ...
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| Aggregation Prevention Assay for Chaperone Activity of Proteins Using Spectroflurometry
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Author:
Date:
2017-01-20
[Abstract] The ability to stabilize other proteins against thermal aggregation is one of the major characteristics of chaperone proteins. Molecular chaperones bind to nonnative conformations of proteins. Folding of the substrate is triggered by a dynamic association and dissociation cycles which keep the substrate protein on track of the folding pathway (Figure 1). Usually molecular chaperones exhibit differential affinities with different conformations of the substrate. With the exception of the sHsp family of molecular chaperones, the shift from a high-affinity binding state to the low-affinity ...
[摘要] 稳定其他蛋白质抵抗热聚集的能力是伴侣蛋白质的主要特征之一。分子伴侣与蛋白质的非构象构象结合。通过动态关联和解离循环来触发底物的折叠，这些循环使底物蛋白保持在折叠通路上（图1）。通常分子伴侣表现出与底物不同构象的差异亲和力。除了分子伴侣的sHsp家族之外，从高亲和力结合状态向低亲和力释放状态的转变由ATP结合和水解引发（Haselback和Buchner，2015）。聚集预防测定是一种简单但尚未确定的测定法，用于确定热不稳定蛋白质如麦芽糖糊精葡糖苷酶（MalZ），柠檬酸盐合酶（CS）和Nde I的伴侣活性。这是基于具有伴侣相似活性的蛋白质预防来自热聚集的蛋白质底物（MalZ，CS和Nde I）的前提。在这里，我们描述了使用我们实验室鉴定的两种不同伴侣蛋白，抵抗素和MoxR1的聚合预防测定的详细方案。分析抗性蛋白（hRes）和MoxR1 a结核分枝杆菌蛋白质对预防MalZ /柠檬酸合酶（CS）/ Nde I聚集的影响。
背景 ![]()
图1.分子伴侣的作用机制。柠檬酸合酶通过越来越多的结构化中间体（I <1>，2 ...
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| Detection of Membrane Potential in Mycobacterium tuberculosis
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Author:
Date:
2013-06-05
[Abstract] DiOC2 (Novo et al., 2000) exhibits green fluorescence in all bacterial cells, but the fluorescence shifts towards red emission as the dye molecules self associate at the higher cytosolic concentrations caused by larger membrane potentials. Proton ionophores such as CCCP destroy membrane potential by eliminating the proton gradient. The magnitude of membrane potentials varies with different bacterial species. For many gram-positive species, including Staphylococcus aureus and Micrococcus luteus, the red:green ratio tends to vary with the intensity of the ...
[摘要] DiOC 2（Novo等人，2000）在所有细菌细胞中表现出绿色荧光，但是随着染料分子在更高的胞质浓度自缔合，荧光向红色发射移动 由较大的膜电位引起。 质子离子载体如CCCP通过消除质子梯度来破坏膜电位。 膜电位的大小随不同的细菌种类而变化。 对于许多革兰氏阳性菌种，包括金黄色葡萄球菌和藤黄微球菌，红色：绿色比倾向于随着质子梯度的强度而变化，而在许多革兰氏阴性菌中 例如大肠杆菌和霍乱沙门氏菌，染料的响应似乎不与质子梯度强度成比例。 结核分枝杆菌本身是一种难以处理的生物体，因为其刚性细胞壁。
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