| Live Intravital Intestine with Blood Flow Visualization in Neonatal Mice Using Two-photon Laser Scanning Microscopy
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Author:
Yuhki Koike, Bo Li, Yong Chen, Niloofar Ganji, Mashriq Alganabi, Hiromu Miyake, Carol Lee, Alison Hock, Richard Wu, Keiichi Uchida, Mikihiro Inoue, Paul Delgado-Olguin and Agostino Pierro,
Date:
2021-03-05
[Abstract] This protocol describes a novel technique to investigate the microcirculation dynamics underlying the pathology in the small intestine of neonatal mice using two-photon laser-scanning microscopy (TPLSM). Recent technological advances in multi-photon microscopy allow intravital analysis of different organs such as the liver, brain and intestine. Despite these advances, live visualization and analysis of the small intestine in neonatal rodents remain technically challenging. We herein provide a detailed description of a novel method to capture high resolution and stable images of the small ...
[摘要] [摘要]该协议描述了一种使用双光子激光扫描显微镜（TPLSM）研究新生小鼠小肠病理基础的微循环动力学的新技术。多光子显微镜技术的最新技术进步允许对不同器官（例如肝，脑和肠）进行活体分析。尽管取得了这些进步，但对新生啮齿类动物的小肠进行实时可视化和分析在技术上仍然具有挑战性。我们在此提供了一种新方法的详细描述，该方法最早可在出生后第0天捕获新生小鼠中小肠的高分辨率和稳定图像。这种成像技术可以全面了解小肠微循环中的发育和血流动力学。
[背景]
体内实时成像的发展
通过允许在实验动物上进行实时成像，最近的技术进步克服了常规组织学分析的局限性。与传统的组织学显微镜技术相比，活体检查方法可洞悉活组织中以前未知的形态发生和功能过程。此外，该信息可以实时获取，而替代技术仅限于时间快照。替代技术对确定在实验方案中的特定过程中获取图像的最佳时机具有额外的要求。
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| Photothrombotic Induction of Capillary Ischemia in the Mouse Cortex during in vivo Two-Photon Imaging
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Photothrombosis of blood vessels refers to the activation of a circulating photosensitive dye with a green light to induce clotting in vivo (Watson et al., 1985). Previous studies have described how a focused green laser could be used to noninvasively occlude pial arterioles and venules at the brain surface (Schaffer et al., 2006; Nishimura et al., 2007; Shih et al., 2013). Here we show that small regions of the capillary bed can similarly be occluded to study the ischemic response within the capillary system of the mouse cerebral cortex. The ...
[摘要] 血管的血栓形成是指用绿光激活循环的光敏染料，以在体内诱发凝血（Watson等人，1985）。以前的研究已经描述了如何将聚焦的绿色激光器用于非侵入性地封闭脑表面的小动脉和小静脉（Schaffer等人，2006; Nishimura等人， 2007; Shih等人，2013）。这里我们显示毛细血管床的小区域可以类似地闭塞，以研究小鼠大脑皮质毛细管系统内的缺血反应。这种方法的优点是缺血区被限制在约150-250μm的直径。这允许退化过程的更高质量的双光子成像，否则由于过度的光子散射，否则难以用大规模中风的模型来可视化。毛细血管闭塞的结果是血脑屏障（BBB）的泄漏。在这里，通过使用双光子成像数据集，我们展示了如何通过确定静脉内染料外渗的空间范围和定位来量化毛细血管渗漏。
【背景】存在许多动物模型通过闭塞主要大脑动脉大规模诱发缺血（Carmichael，2005）。然而，在体内双光子成像中不能获得中风的一些方面。在经历更严重缺血的区域，由于离子不平衡而导致细胞膨胀，这种水肿过程有助于增加光散射，大大降低了体内双光子成像的质量和深度。较小的局部缺血区域将减少光子散射，并且仍然允许与局部缺血相关的神经血管变化随着时间的推移在体内更清晰地显现。
我们最近表明，空间受限区域的缺血可以通过聚焦的血栓形成的皮质毛细血管床照射产生（Underly等人，2017）。毛细血管闭塞是高度可重复的，可以针对特定的位置，并通过颅骨成像窗口在精确的时间开始。所得到的缺血区域占据通过典型颅窗可接近的面积的1％（图1D和1E），允许在一个窗口中检查多个笔触。 ...
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| Targeted Occlusion of Individual Pial Vessels of Mouse Cortex
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Author:
Date:
2013-09-05
[Abstract] Targeted photothrombosis is a method to occlude individual arterioles and venules that lie on the surface of the cerebral cortex. It has been used to study collateral flow patterns within the pial vascular network following occlusion of single surface vessels (Schaffer et al., 2006; Blinder et al., 2010; Nguyen et al., 2011), as well as to generate localized ischemic strokes following occlusion of single penetrating vessels (Nishimura et al., 2007; Drew et al., 2010; Shih et al., 2013). The intravascular clot is formed by irradiation of a ...
[摘要] 目标光血栓形成是阻塞位于大脑皮质表面上的个体小动脉和小静脉的方法。它已经用于在封闭单表面血管后研究在Pial血管网内的侧支血流模式（Schaffer等人，2006; Blinder等人，2010; Nguyen 2011），以及在单一穿透血管闭塞后产生局部缺血性中风（Nishimura et al。，2007; Drew et al。 ，2010; Shih et al。，2013）。在注射循环的光敏剂，玫瑰红（Watson等人，1985）后，通过用聚焦的绿色激光器照射目标血管形成血管内凝块。我们简要介绍了定制设计和商业双光子成像系统的修改，引入绿色激光用于光血栓形成。我们进一步提供如何闭塞麻醉鼠标的体感皮层内的单个穿透小动脉的说明。
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