| A Method for Extracting the Nuclear Scaffold from the Chromatin Network
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Each cell contains many large DNA polymers packed in a nucleus of approx. 10 μm in diameter. With histones, these DNA polymers are known to form chromatins. How chromatins further compact in the nucleus is unclear but it inevitably depends on an extensive non-chromatin nuclear scaffold. Imaging of endogenous chromatin network and the complementary scaffold that support this network has not been achieved but biochemical and proteomic investigations of the scaffold can still provide important insights into this chromatin-organizing network. However, this demands highly inclusive and ...
[摘要] 每个细胞都含有许多大型DNA聚合物，其中包含大约一个核。直径10微米。用组蛋白，已知这些DNA聚合物形成染色质。染色质在核中如何进一步致密还不清楚，但它不可避免地依赖于广泛的非染色质核支架。内源性染色质网络的成像和支持该网络的互补支架尚未实现，但支架的生化和蛋白质组学研究仍然可以提供关于该染色质组织网络的重要见解。但是，这需要高度包容和可重复的提取核支架。我们最近开发了一个简单的协议，用于从染色质中释放脚手架组件。提取物的包容性由以下观察结果证实：当从核中提取时，剩余的核染色质被释放为延伸且通常平行的染色质纤维。基本上，该方案包括纯核的产生，用Triton X-100处理细胞核以产生包膜消耗的细胞核（TxN），并在含蔗糖的缓冲液中在500mM NaCl中提取细胞核。 TxN的这个组合提取被称为TxNE。
【背景】通过蛋白质和核糖核蛋白的复杂支架，染色质在细胞核中密集并动态地压缩。与细胞骨架网络不同（Fischer和Fowler，2015），对这种核支架的显微观察在技术上是具有挑战性的。这可能反映了每个细胞核内染色质的主导地位，支架与细胞核交织在一起。核的球形排列也对成像这种支架结构造成挑战。核支架的主要元素是核层（NL）（Gruenbaum和Foisner，2015）。 ...
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| Assays of Polyphenol Oxidase Activity in Walnut Leaf Tissue
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Author:
Date:
2014-08-20
[Abstract] Polyphenol oxidase (PPO) is an enzyme that catalyzes the hydroxylation of monophenols into ortho-diphenols (cresolase activity) and the oxidation of o-diphenols into quinones (catecholase activity) (Figure 1). These quinones spontaneously polymerize to form dark-colored phytomelanins, most often seen in the browning of damaged plant tissue. PPO activity can be easily assayed in crude protein extracts from English walnut (Juglans regia) leaves and from many other plant tissue extracts. PPO activity is most commonly measured by spectrophotometric assay, in which the rate of ...
[摘要] 多酚氧化酶（PPO）是催化单酚羟基化成邻二酚（甲酚酶活性）和将β-二酚氧化成醌（儿茶酚酶活性）（图1）的酶。这些醌自发聚合形成深色的植物色素，最常见于受损的植物组织的褐变。 PPO活性可以容易地在来自英国胡桃（Juglans regia）叶和来自许多其它植物组织提取物的粗蛋白提取物中测定。 PPO活性最通常通过分光光度测定法测量，其中植物肉豆蔻毒素产生的速率被量化，或通过氧电极测定，其中酶对氧的消耗量化（图1）。尽管更简单，分光光度测定的效用受到从不同酚类底物产生的植物角蛋白的最大吸收的变化的限制。氧电极测定通常被认为是用于测量PPO活性的"金标准"，但是与单酚底物一起实施是更费时和困难的，因为与儿茶酚酶活性相比，甲酚水解酶活性通常相当低。该方案将描述从核桃叶的粗蛋白质提取，分光光度测定法和用于测定PPO活性的氧电极测定法。
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