| Functional ex-vivo Imaging of Arterial Cellular Recruitment and Lipid Extravasation
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] The main purpose of this sophisticated and highly versatile method is to visualize and quantify structural vessel wall properties, cellular recruitment, and lipid/dextran extravasation under physiological conditions in living arteries. This will be of interest for a broad range of researchers within the field of inflammation, hypertension, atherosclerosis, and even the pharmaceutical industry. Currently, many researchers are using in vitro techniques to evaluate cellular recruitment, like transwell or flow chamber systems with cultured cells, with unclear physiological comparability. ...
[摘要] 这种复杂和多功能方法的主要目的是在活体动物的生理条件下可视化和量化结构血管壁性质，细胞募集和脂质/葡聚糖外渗。这对于广泛的炎症，高血压，动脉粥样硬化甚至制药行业的研究人员都是有兴趣的。目前，许多研究人员正在使用体外技术来评估细胞募集，如具有培养细胞的transwell或流动室系统，具有不清楚的生理学可比性。这里介绍的方法详细描述了使用复杂而灵活的方法来研究在动脉血流条件下体外新鲜和活的鼠颈动脉中的动脉壁特性和白细胞募集。该模型模拟体内情况，并允许使用从两个不同供体分离的细胞和动脉（例如，野生型与特异性敲除）组合成一个实验，从而提供关于白细胞和/或内皮细胞特性的信息两个捐助者。因此，该模型可以被认为是复杂和侵入性体内研究的替代方案，例如对比实验。
【背景】该方法的核心是应用双光子激光扫描显微镜（TPLSM）来显示安装在动脉造影腔室中的体外颈动脉，其已显示模拟体内情况下存在的生理条件（Megens et al。，2007）。新鲜的动脉，在我们这种情况下是小鼠颈动脉，但该方法也适用于其他类似大小的血管（包括人类血管）（Bloksgaard等，2015），仔细提取并安装在使用细线的两个玻璃微量移液管的动脉造影室。该腔室应提供足够的空间以用显微镜物镜（优选为具有> ...
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| Microinjection of Virus into Lumbar Enlargement of Spinal Dorsal Horn in Mice
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] In order to explore the role of a specific gene/protein in the specific segment of the spinal cord, the technique of intraspinal injection is particularly used to deliver viral vectors targeting the specific gene/protein. These viral vectors can knockdown or overexpress the specific gene/protein in specific cells (glial cells or neurons). In this protocol, lentivirus containing shRNA for CXCL13 were injected into the dorsal horn of the spinal lumbar enlargement segment (Jiang et al., 2016). This technique allows the study of the role of CXCL13 in the ipsilateral dorsal horn in ...
[摘要] 为了探索特定基因/蛋白质在脊髓特定节段中的作用，脊柱内注射技术特别用于递送靶向特定基因/蛋白质的病毒载体。这些病毒载体可以敲低或过表达特定细胞（神经胶质细胞或神经元）中的特定基因/蛋白。在该协议中，将包含用于CXCL13的shRNA的慢病毒注射到脊柱腰扩大节的背角中（Jiang等人，2016）。这种技术允许研究CXCL13在同侧背角中在神经性疼痛中的作用，而不影响DRG或对侧背角。
[背景] 脊髓背角是一种组织良好和分层的神经元复合体，其将来自身体表面和深部组织的感觉信息传输到大脑。脊髓背角神经元的活动可以通过原始传入，下行纤维以及脊髓神经胶质细胞如星形胶质细胞和小胶质细胞来调节。了解如何脊髓神经元或神经胶质细胞中的特定蛋白质和基因有助于生理和病理性疼痛的机制越来越感兴趣。为了探索特定基因/蛋白质在脊髓中的作用，鞘内注射的技术通常用于递送激动剂，拮抗剂，siRNA或miRNA进入蛛网膜下腔。特定基因的敲除和条件缺失是另一种详尽且昂贵的方法。然而，这些方法的限制是缺乏脊髓节段和细胞类型特异性删除或过表达。这个协议表明脊柱内注射可以传递特定的病毒载体到特定的节段脊髓背角，调查基因的功能区域和细胞类型特定的方式。
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| Mouse Retinal Whole Mounts and Quantification of Vasculature Protocol
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Author:
Date:
2015-08-05
[Abstract] Angiogenesis is the formation of new blood vessels from a pre-existing vascular bed. It is a multi-step process beginning with enzymatic degradation of the capillary basement membrane, followed by endothelial cell (EC) proliferation, migration, tube formation, assembly of a new basement membrane, and pericyte stabilization. Aberrant angiogenesis plays a major role in the pathogenesis of many diseases. The regulation of this complex process is an important therapeutic target. Success in this pursuit, however, requires the development of in vivo angiogenesis models that provide a ...
[摘要] 血管生成是从预先存在的血管床形成新的血管。它是一个多步骤的过程，从毛细血管基底膜的酶降解开始，然后是内皮细胞（EC）增殖，迁移，管形成，新基底膜的装配和周细胞稳定。异常血管生成在许多疾病的发病机理中起重要作用。这种复杂过程的调节是重要的治疗靶标。然而，这种追求的成功需要开发在体内血管生成模型，其为血管生成调节以及药物开发和测试的机械研究提供可靠和容易的平台（Carmeliet和Jain，2011）。
小鼠视网膜血管系统的产后发育提供了一种独特且强大的体内血管生成模型，因为与其他物种不同，小鼠在出生后经历其视网膜血管的广泛的血管生成依赖性成熟。因此，该模型对于胚胎血管形成的机械研究也是非常有用的（Stahl等人，2010; Adini等人，2003）。
此协议描述了整个安装处理鼠标眼睛以便视网膜血管系统可视化的步骤。
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