| Morphological Analysis of Dopaminergic Neurons with Age Using Caenorhabditis elegans GFP Reporter Strains
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Author:
Date:
2018-05-05
[Abstract] This protocol describes how to quantify different morphological defects as observed in the dopaminergic neurons using C. elegans GFP reporter strains with age.
[摘要] 该协议描述了如何量化使用C在多巴胺能神经元中观察到的不同形态学缺陷。 线虫绿色荧光蛋白报告菌株与年龄。
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| Analysis of Mitochondrial Structure in the Body Wall Muscle of Caenorhabditis elegans
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Author:
Date:
2018-04-05
[Abstract] Mitochondrial function is altered in various pathologies, highlighting the crucial role mitochondria plays in maintaining cellular homeostasis. Mitochondrial structure undergoes constant fission and fusion in response to changing cellular environment. Due to this, analyzing mitochondrial structure could provide insight into the physiological state of the cell. In this protocol, we describe a method to analyze mitochondrial structure in body wall muscles in the nematode Caenorhabditis elegans, using both transgenic and dye-based approaches.
[摘要] 线粒体功能在各种病理学中被改变，突出了线粒体在维持细胞稳态方面发挥的关键作用。 线粒体结构响应不断变化的细胞环境而经历不断的分裂和融合。 因此，分析线粒体结构可以提供对细胞生理状态的了解。 在这个协议中，我们描述了一种使用转基因和基于染料的方法来分析线虫秀丽隐杆线虫体壁细胞线粒体结构的方法。
【背景】线粒体参与ATP产生，细胞呼吸，钙缓冲和反应性氧化物（ROS）代谢（Brookes等人，2004）。线粒体结构和功能是动态和紧密联系的，因此分析线粒体结构可以为线粒体健康状况提供线索（Sarasija and Norman，2015）。我们制定了两套方案来评估秀丽隐杆线虫体壁细胞的线粒体结构。在第一个方案中，我们使用了转基因的ccIs4251株，其中GFP靶向体壁细胞线粒体的基质以显现线粒体（Fire等人，1998） 。在第二种方案中，我们使用线粒体靶向染料，MitoTracker TM Red CMXRos和四甲基罗丹明乙酯（TMRE）来测定体壁肌肉线粒体的结构完整性。通常，用于体内成像的动物是麻醉的，然而麻醉动物可能导致线粒体形态改变（Han等人，2012），使数据分析变得复杂。我们的协议允许活体非麻醉线虫体内线粒体结构的体内成像。
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| Fluorescence Recovery after Photobleaching (FRAP) Assay to Measure the Dynamics of Fluorescence Tagged Proteins in Endoplasmic Reticulum Membranes of Plant Cells
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Author:
Date:
2014-10-20
[Abstract] In this protocol, we used fluorescence recovery after photobleaching (FRAP) to measure the influence that some mutations and drug treatment have on mobility of a green fluorescent protein (GFP)-fused viral transmembrane protein into endoplasmic reticulum membranes (Serra-Soriano et al., 2014). The proteins of interest were transiently expressed in Nicotiana benthamiana (N. benthamiana) epidermic cells by agro-infiltration. To minimize transient overexpression artifacts, fluorescence intensity values were gathered at 36 hpi using an inverted Zeiss LSM 780 confocal ...
[摘要] 在该协议中，我们使用光漂白（FRAP）后的荧光恢复来测量一些突变和药物治疗对于将绿色荧光蛋白（GFP） - 融合的病毒跨膜蛋白移动到内质网膜中的影响（Serra-Soriano， et al。，2014）。感兴趣的蛋白质通过农杆菌浸润在烟草（Nicotiana benthamiana）（本塞姆氏烟草）表皮细胞中瞬时表达。为了使瞬时过表达伪像最小化，使用倒置Zeiss LSM 780共聚焦显微镜在36hpi收集荧光强度值。只有表现出中等表达水平和通过GFP标记的蛋白的ER的均匀分布的表皮细胞用于进一步的实验。为了检查肌动蛋白聚合在GFP标记的蛋白质的动员中的作用，我们用拉特管素B，肌动蛋白聚合的抑制剂或用DMSO作为对照预处理组织样品。使用所产生的荧光恢复曲线来获得对应于流动级分的最大荧光回收率（MFR）的百分比和最大回收的半衰期（t 1/2）/sub>）值。
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