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Author:
Date:
2014-11-20
[Abstract] Some proteins utilize nucleic acids to guide them to complementary nucleic acid targets. One example is prokaryotic Argonaute protein, which, binds small single stranded DNA molecules as guides (Swarts et al., 2014). This protocol describes a method to purify DNA guides from these proteins. It also describes a PCR-based method to enrich the guides by PCR amplification. This methods relies on addition of a poly-A tail at the 3’-end of the ssDNA molecules by Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT), followed by ligation of a oligonucleotide to the 5’-end of the ssDNA molecule using ...
[摘要] 一些蛋白利用核酸来将它们引导至互补核酸靶。 一个实例是原核Argonaute蛋白，其结合小的单链DNA分子作为指导（Swarts等人，2014）。 该协议描述了从这些蛋白质中纯化DNA指南的方法。 它还描述了基于PCR的方法以通过PCR扩增来富集指南。 该方法依赖于通过末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）在ssDNA分子的3'末端添加聚腺苷酸尾，然后使用T4 RNA连接酶将寡核苷酸连接到ssDNA分子的5'末端， 和通过PCR扩增。 所产生的dsDNA产物适合于传统的克隆和测序以及高通量测序。 重要的是，与ssDNA分子匹配的链的信息在该过程中不会丢失。
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