| Characterization of Hippocampal Adult-borne Granule Cells in a Transient Cerebral Ischemia Model
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Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] Long-term consequences of stroke significantly impair the quality of life in a growing population of stroke survivors. Hippocampal adult neurogenesis has been hypothesized to play a role in the pathophysiology of cognitive and neuropsychiatric long-term sequelae of stroke. Reliable animal models of stroke are paramount to understanding their biomechanisms and to advancing therapeutic strategies. We present a detailed protocol of a transient cerebral ischemia model which does not cause direct ischemic damage in the hippocampus, allowing investigations into the pathophysiology of long-term ...
[摘要] [摘要]中风的长期后果严重损害了越来越多的中风幸存者的生活质量。假定海马成年神经发生在中风的认知和神经精神病学长期后遗症的病理生理学中起作用。可靠的中风动物模型对于理解其生物机制和推进治疗策略至关重要。我们提出 暂时性脑缺血模型的详细协议，该模型不会在海马体中引起直接缺血损伤，从而可以研究中风的长期神经认知缺陷的病理生理学。此外，我们描述了一种用于获取成人海马颗粒细胞的电生理学和形态学特征的急性海马切片的协议。还讨论了与从小细胞（例如未成熟的成年颗粒细胞）进行电生理记录有关的特殊性。本协议可以通过多模式研究（行为，形态结构，生化）加以补充，以期有希望促进研究和中风的长期后遗症的发展以及发现新的治疗机会。
[背景]中风是在发达国家发病率和死亡率的重要原因引起急性和延迟赤字。虽然针对缺血性中风恢复血流的干预策略在降低急性发病率和死亡率方面已经变得更加有效，但中风的长期后果（如中风后抑郁和中风后认知功能障碍和痴呆症）目前正在逃避临床治疗（Wang等。，2010; Loubinoux等人，2012; Mijajlovic ...
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| Cation (Ca2+ and Mn2+) Partitioning Assays with Intact Arabidopsis Chloroplasts
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Determination of the relative distribution of Ca2+ and Mn2+ is an important tool for analyzing mutants showing altered levels of calcium and/or manganese transporters in the chloroplast envelope or thylakoid membrane. The method described in this protocol allows quantitative analyses of the relative distribution of calcium and manganese ions between chloroplast stroma and thylakoids using the isotopes [45Ca] and [54Mn] as radioactive tracers. To avoid contaminations with non chloroplastidic membrane systems, the method is designed for isolating pure ...
[摘要] 测定Ca 2 + 和Mn 2 + 的相对分布是分析在叶绿体包膜或类囊体中钙和/或锰转运蛋白水平发生变化的突变体的重要工具膜。该方案中描述的方法允许使用同位素[ 45 Ca]和[ 54 Mn]定量分析叶绿体基质和类囊体之间钙和锰离子的相对分布，作为放射性示踪剂。为了避免非叶绿体膜系统的污染，该方法被设计用于分离拟南芥的纯和完整的叶绿体。通过Percoll梯度离心分离完整的叶绿体。然后在轻孵育步骤期间使叶绿体吸收[ 45 Ca]或[ 54 Mn]。孵化后，叶绿体保持完整或渗透/机械处理以释放类囊体。通过液体闪烁计数可以确定掺入量[ 45 Ca]或[ 54 Mn]的量，并计算相对分布。
背景 钙和锰是光系统II的结构组分，形成无机Mn 4 O 5 O 5 O 3簇，其中水氧化发生电子，质子和分子氧的结果。通过叶绿体包膜和类囊体膜的Ca 2+ / +和/或超氧化物质是使得植物细胞满足PSII对这些阳离子的高需求的基本过程。在先前的研究中，使用来自豌豆植物的分离的类囊体膜（Ettinger等人）分析了Ca 2 + / H ...
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| TGFβ Stimulation Assay
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Author:
Date:
2014-12-05
[Abstract] TGFβ is part of a growth factor superfamily which modulates cell growth, differentiation, adhesion, migration, ECM synthesis and apoptosis (Massague, 1998; Siegel and Massague, 2003). Free TGFβ binds to its high affinity TGFβ receptor, a receptor serine/threonine kinase, inducing phosphorylation of Smad2/3 which subsequently forms a complex with Smad4 to translocate to the nucleus where it interacts with multiple co-activators and repressors generating distinct transcriptional responses.
Indeed, TGFβ signaling shows a remarkable cellular context dependency and apparent ...
[摘要] TGFβ是调节细胞生长，分化，粘附，迁移，ECM合成和凋亡的生长因子超家族的一部分（Massague，1998; Siegel和Massague，2003）。游离TGFβ结合到其高亲和力TGFβ受体，一种受体丝氨酸/苏氨酸激酶，诱导Smad2/3的磷酸化，随后与Smad4形成复合物转移到细胞核，其中它与多种共激活剂和阻遏物相互作用产生不同的转录反应。实际上，TGFβ信号传导显示出显着的细胞环境依赖性和表观多功能性：例如TGFβ能够抑制许多上皮细胞中的细胞增殖，但也可以增强成纤维细胞中的增殖和内皮细胞中的细胞生长（Guasch等人，2007; Xiao等人，2012年）;它增强干细胞多能性，但促进其他细胞的分化（Park，2011）;在癌症发展中，它抑制恶变前细胞增殖，但同时促进转移到转移表型（Chaudhury和Howe，2009）。
TGFβ刺激测定监测细胞对TGFβ的反应性。在TGFβ刺激时，可以分析短期效应例如Smad2磷酸化和长期效应例如细胞增殖。将描述用于小鼠角质形成细胞的测定，其中TGFβ强烈抑制细胞增殖，但是这两种测定也适用于其它细胞类型。
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