| Determination of Reduced and Total Glutathione Content in Extremophilic Microalga Galdieria phlegrea
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] Glutathione is an important molecule involved in the primary and secondary metabolism of all organisms. The Glutathione redox status is an indicator of the cellular redox state. Therefore, it is important to have precise methods on hand to determine the glutathione redox status in the cell. In this protocol, we describe an improved spectrophotometric method to estimate the content of reduced (GSH) and oxidized (GSSG) forms of glutathione in the extremophilic microalga Galdieria phlegrea.
[摘要] 谷胱甘肽是涉及所有生物体的初级和次级代谢的重要分子。 谷胱甘肽氧化还原状态是细胞氧化还原状态的指标。 因此，重要的是要有精确的方法来确定细胞中的谷胱甘肽氧化还原状态。 在本协议中，我们描述了一种改进的分光光度法，用于估计极地微藻Galdieria phlegrea中还原（GSH）和氧化（GSSG）形式的谷胱甘肽的含量。
【背景】谷胱甘肽（γ-L-谷氨酰基-L-半胱氨酰 - 甘氨酸）是存在于所有已知生物体中的必需三肽，其范围从细菌到人类（Frendo等人，2013）。它涉及到几种不同的细胞保护作用（图1）。谷胱甘肽被认为是具有氧化还原信号功能的优异的抗氧化分子。它还参与对非生物和生物胁迫的反应，并涉及细胞的初级代谢（C，N，S代谢）（Noctor et al。，2012;Hernándezet al。 ，2015; Salbitani等人，2015）。
＆NBSP;在植物细胞中，还原型和氧化形式的谷胱甘肽（GSH / GSSG）之间的比例在信号传导和许多防御机制的激活中起重要作用（Foyer和Noctor，2012; Salbitani等人， ，2015）。通常严格控制的GSH / GSSG氧化还原状态可能在应力条件下瞬时转向稍微氧化的值（Tausz等人，2004）。
＆NBSP;在过去，一些研究人员已经开发和修改了分光光度法来确定几种生物体中的GSH和GSSG（Anderson，1985; ...
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| Isolation of Outer Membrane Vesicles from Phytopathogenic Xanthomonas campestris pv. campestris
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Author:
Date:
2017-03-05
[Abstract] Gram-negative bacteria naturally release outer membrane vesicles (OMVs) to the surrounding environment. OMVs contribute to multiple processes, such as cell-cell communication, delivery of enzymes and toxins, resistance to environmental stresses and pathogenesis. Little is known about OMVs produced by plant-pathogenic bacteria, and their interactions with host plants. The protocol described below discusses the isolation process of OMVs from Xanthomonas campestris pv. campestris strain 33913, a bacterial pathogen of Crucifiers. Nevertheless, this protocol can be used and/or ...
[摘要] 革兰氏阴性细菌自然释放外膜囊泡（OMVs）到周围环境。 OMV有助于多个过程，如细胞通讯，酶和毒素的传递，对环境的压力和发病机制的抵抗。对植物病原菌产生的OMV及其与宿主植物的相互作用知之甚少。下面描述的协议讨论了野生黄单胞菌（Manthomonas campestris）的OMV的隔离过程。菌种33913（一种Crucizer的细菌病原体）。然而，该方案可以用于和/或适于将OMV与其他植物病原细菌分离，以促进在植物 - 微生物相互作用的背景下对OMV的研究。
背景 细胞外泡（EV）释放是许多生物从生命各个领域共享的过程。在革兰氏阴性细菌中，大多数EV是外膜起泡的结果，最终夹住细菌细胞壁，因此被称为外膜囊泡（OMV）。 OMV的研究重点是OMV生物发生，货物，功能和与宿主生物的相互作用。迄今为止，大多数关于OMV的研究集中在人类和环境细菌的细菌病原体上，然而对植物病原菌的OMV研究很少。这里描述的协议是由Chutkan等人描述的方案改编的。 （2013）稍作修改，并在此介绍植物病原体X。 campestris pv。 campestris 。为了我们的理解，这是第一个完全详细的OMV与植物生长细菌分离的方案，我们希望它可以作为对这一主题感兴趣的其他研究组的指导性协议。
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| Protein Expression Protocol for an Adenylate Cyclase Anchored by a Vibrio Quorum Sensing Receptor
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Author:
Date:
2017-01-20
[Abstract] The direct regulation of a mycobacterial adenylate cyclase (Rv1625c) via exchange of its membrane anchor by the quorum sensing receptor CqsS (Vibrio harveyi) has recently been reported (Beltz et al., 2016). This protocol describes the expression and membrane preparation for these chimeric proteins.
[摘要] 最近报道了通过其群岛感应受体CqsS（Vibrio harveyi）交换其膜锚定点直接调节分枝杆菌腺苷酸环化酶（Rv1625c）（Beltz等，2016）。 该方案描述了这些嵌合蛋白的表达和膜制备。
【背景】膜分隔的哺乳动物腺苷酸环化酶（AC）是IIIa类AC。调节是间接通过第一信使细胞外刺激G蛋白偶联受体（GPCR）而在细胞内释放的刺激（或抑制性）Gα-蛋白。 AC产生使用ATP作为底物的通用第二信使cAMP。脊椎动物AC中两个六角膜结构域的大小远远超过了对简单膜锚固的要求。然而，这种内在的膜锚定/受体结构域的调节特征是未知的。为了研究潜在的功能，选择了可以容易地在细菌中表达的分类细菌的典型类IIIa AC Rv1625c（Guo等人，2001和2005）与哺乳动物AC同工型相反。我们用来自哈维氏弧菌CqsS的六价体积感知（QS）受体的受体结构域取代了Rv1625c AC的六角膜锚，以检查我们是否可以通过QS配体的霍乱自动诱导剂直接调节AC -1'，CAI-1。 QS受体和IIIa类膜锚的设计是非常相似的，即最小的跨膜α-螺旋和极短的连接环。
我们已经证明了通过细胞外信号直接调节IIIa ...
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