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Date:
2016-12-20
[Abstract] The cortical actomyosin cytoskeleton is found in all non-muscle cells where a key function is to control mechanical force (Salbreux et al., 2012). When coupled to E-cadherin cell-cell adhesion, cortical actomyosin generates junctional tension that influences many aspects of tissue function, organization and morphogenesis (Lecuit and Yap, 2015). Uncovering the molecular mechanisms underlying the generation of junctional tension requires tools for measuring it in live cells with a high spatio-temporal resolution. For this, we have set up a technique of laser ablation, in which we use ...
[摘要] 皮质肌动球蛋白细胞骨架在所有非肌肉细胞中发现，其中关键功能是控制机械力（Salbreux等人，2012）。当与E-钙粘蛋白细胞粘附相结合时，皮层肌动蛋白产生连接性张力，影响组织功能，组织和形态发生的许多方面（Lecuit和Yap，2015）。揭示连接张力生成所依赖的分子机制需要用于在活细胞中测量具有高时空分辨率的工具。为此，我们设计了一种激光烧蚀技术，其中我们使用双光子激光器的高功率输出来在E-cadherin-GFP标记的细胞粘附部位物理切割肌动蛋白皮质。因此，张力可视化为在切割/切割之后定义连接点的顶点的向外反冲。后坐力与时间的分析允许提取与消融之前施加到接合处的收缩力量（初始反冲）相关的参数以及连接的弹性与连接皮层浸入的介质（细胞质）的粘度之间的比率。使用这种方法，我们发现Src蛋白酪氨酸激酶（Gomez等人，2015）;肌动蛋白结合蛋白如原肌球蛋白（Caldwell等，2014）和N-WASP（Wu等人，2014）; Myosin II（Priya等人，2015）和coronin-1B（Michael等人，2016）有助于负责在细胞细胞产生张力的分子装置路口该协议描述了用于设置激光烧蚀实验的实验程序，以及如何优化消融和采集条件以实现连接张力的最佳测量。它还提供了评估收缩力变化以及细胞弹性和/或细胞质粘度所需的后采集分析的完整描述。
背景 ...
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