| Lymphocyte Isolation, Th17 Cell Differentiation, Activation, and Staining
|
|
Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] In vitro Th17 (α, β T helper cell which produce IL-17A, IL-17F and IL-22) differentiation has been routinely used for functional T cells studies. Here we describe a method for Th17 cell differentiation.
[摘要] Th17（产生IL-17A，IL-17F和IL-22的α，βT辅助细胞）分化已经常规用于功能性T细胞研究。 这里我们描述Th17细胞分化的方法。
关键词： Th17，IL-17，FACS
[背景] T细胞 是介导宿主防御细菌，病毒和真菌以及共生的关键（Kumar等人，2016）。 T细胞可以基于它们产生特异性细胞因子的能力进一步细分为T辅助（Th1），Th2和Th17子集。 幼稚T细胞可以响应于特异性细胞因子刺激在体外培养中分化成特异性T细胞亚群。 体外产生的Th1，Th2和Th17细胞已经帮助我们理解它们的分化和它们的效应子功能的分子机制。 在这里，我们描述了Th17细胞生成的基本协议。
|
|
|
| Evaluation of Cross-presentation in Bone Marrow-derived Dendritic Cells in vitro and Splenic Dendritic Cells ex vivo Using Antigen-coated Beads
|
|
Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] Antigen presentation by MHC class I molecules, also referred to as cross-presentation, elicits cytotoxic immune responses. In particular, dendritic cells (DC) are the most proficient cross-presenting cells, since they have developed unique means to control phagocytic and degradative pathways.
This protocol allows the evaluation of antigen cross-presentation both in vitro (by using bone marrow-derived DC) and ex vivo (by purifying CD8+ DC from spleen after incorporation of particulate antigen) using ovalbumin (OVA)-coupled particles. Cross-presentation ...
[摘要] 通过MHC I类分子的抗原呈递，也称为交叉呈递，引起细胞毒性免疫应答。特别地，树突细胞（DC）是最熟练的交叉呈递细胞，因为它们已经开发了控制吞噬和降解途径的独特手段。 <此协议允许在体外（通过使用骨髓衍生的DC）和离体（通过纯化CD8 + ）评价抗原交叉呈递。 （OVA）偶联的颗粒后，来自脾脏的DC/DC结合颗粒抗原）。通过三种不同的读数测量交叉呈递效率：B3Z杂交瘤T细胞系（Karttunen等人，1992）和抗原特异性CD8 + T细胞的刺激OT-I）（Kurts等人，1996），在用羧基荧光素琥珀酰亚胺酯（CFSE）标记它们之后分析CD69表达或OT-I增殖的OT-I活化。通过使用这种方法，我们可以最近显示DCs能够在TLR4结合时瞬时增加交叉表达效率（Alloatti等人，2015）。 [背景] 在小鼠中，抗原呈递细胞（APC）能够吸收外源抗原以加工它们，并将源自这些外源抗原的肽加载到主要组织相容性复合体（MHC）I类分子上。肽-MHC I复合物随后被转运到质膜，在那里它们可以呈递到CD8 + T细胞，从而促进T细胞活化，这被称为交叉呈递（Joffre等人， al 。，2012）。在不同的APC中，树突状细胞（DC）在交叉呈递方面表现优异，并且包含表达XCR1标记的不同亚群，其已经显示非常有效地交叉呈递抗原（即CD8 + 来自脾的DC和来自皮肤和肺的CD103 ...
|
|
|