| Detection of ASC Oligomerization by Western Blotting
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Author:
Date:
2017-05-20
[Abstract] The apoptosis-associated speck-like protein with a caspase-recruitment domain (ASC) adaptor protein bridges inflammasome sensors and caspase-1. Upon inflammasome activation, ASC nucleates in a prion-like manner into a large and single platform responsible for the recruitment and the activation of caspase-1. Active caspase-1 will in turn promote the proteolytic maturation of the pro-inflammatory cytokine IL-1β. ASC oligomerization is direct evidence for inflammasome activation and its detection allows a read-out independent of caspase-1 and IL-1β. This protocol describes how to detect the ...
[摘要] 具有半胱天冬酶募集区（ASC）衔接蛋白的凋亡相关斑点样蛋白桥联炎症体传感器和半胱天冬酶-1。在炎性体活化后，ASC以类似朊病毒的方式成核，成为负责募集和激活半胱天冬酶-1的大而单一的平台。活性胱天蛋白酶-1将反过来促进促炎细胞因子IL-1β的蛋白水解成熟。 ASC寡聚化是炎性体激活的直接证据，其检测允许读取与caspase-1和IL-1β无关。该方案描述了如何通过蛋白质印迹检测ASC的寡聚化。
背景 Inflammasomes是大量的多蛋白平台，其感测各种微生物，内源和环境胁迫因子，导致促炎IL-1细胞因子家族的成熟（Martinon等人，2002; Sharma和Kanneganti， 2016）。激活后，炎性细胞传感器通过pyrin结构域（PYD）-PYD同型相互作用募集衔接蛋白ASC。 ASC通过胱天蛋白酶激活和募集域（CARD）-CARD相互作用又结合半胱天冬酶-1，并有利于caspase-1的自我蛋白水解切割，导致IL-1β和IL-18的成熟（Hoss等人。，2016）。 Inflammasome激活引发ASC二聚体的超分子寡聚化成称为“ASC-specks”或“pyroptosome”（Fernandes-Alnemri等人，2007）的大交织原纤维。 ASC-speck / ...
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| Measuring Procaspase-8 and -10 Processing upon Apoptosis Induction
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Apoptosis or programmed cell death is important for multicellular organisms to keep cell homeostasis and for the clearance of mutated or infected cells. Apoptosis can be induced by intrinsic or extrinsic stimuli. The first event in extrinsic apoptosis is the formation of the Death-Inducing Signalling Complex (DISC), where the initiator caspases-8 and -10 are fully activated by several proteolytic cleavage steps and induce the caspase cascade leading to apoptotic cell death. Analysing the processing of procaspases-8 and -10 by Western blot is a commonly used method to study the induction of ...
[摘要] 细胞凋亡或程序性细胞死亡对于多细胞生物保持细胞稳态和清除突变或感染细胞是重要的。 细胞凋亡可以由内在或外在的刺激诱导。 外源性凋亡中的第一个事件是死亡诱导信号复合物（DISC）的形成，其中引发剂半胱天冬酶-8和-10通过若干蛋白水解切割步骤完全活化并诱导胱天蛋白酶级联导致凋亡细胞死亡。 通过蛋白质印迹分析procaspases-8和-10的处理是通过死亡受体刺激研究凋亡诱导的常用方法。 为了分析procaspase-8和-10切割，用死亡配体刺激细胞不同的时间间隔，裂解，并使用抗半胱天冬酶-8和抗半胱天冬酶-10抗体进行蛋白质印迹分析。 这可以监测胱天蛋白酶切割产物，从而诱导细胞凋亡。
背景 胱天蛋白酶是作为无活性酶原产生并被蛋白水解切割活化的蛋白酶（Degterev等人，2003）。胱天蛋白酶级联的激活是凋亡细胞死亡期间最重要的事件，其诱导凋亡细胞的典型生化和形态学变化。与非活性执行者procaspases相反，启动子胱天蛋白酶8/9/10具有限制性蛋白水解活性，并在高分子量复合物中完全活化（Lavrik等人，2005）。促凋亡受体TNF-R1（肿瘤坏死因子受体1），CD95 / ...
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