| SDS-PAGE for Silk Fibroin Protein
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Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract] The method and detailed procedure of SDS-PAGE for silk proteins are exactly the same as for other proteins, but the electrophoresis profile of silk protein is often unsatisfactory. The main reason is that their molecular masses are too large, and the regenerated liquid silk is easily coagulated and denatured, resulting in a significant adverse effect on normal electrophoresis. A satisfactory SDS-PAGE profile for silk protein can be obtained by rapidly loading samples, reducing time and temperature when mixing the sample with the loading dye.
[摘要] 丝蛋白的SDS-PAGE方法和详细步骤与其他蛋白质完全相同，但丝蛋白的电泳图谱往往不能令人满意。 主要原因是它们的分子量太大，再生的液体丝很容易凝固和变性，导致对正常电泳的显着不利影响。 通过快速加载样品，在将样品与上样染料混合时减少时间和温度，可以获得令人满意的丝蛋白SDS-PAGE图谱。
【背景】蛋白质或多肽的SDS-PAGE是分析蛋白质亚基分子量的最经典，基本和常用的实验方法之一（Laemmli，1970）。因此，对于大多数蛋白质而言，通常不难获得具有清晰条带的良好SDS-PAGE电泳图谱。
然而，对于参与丝蛋白电泳实验的研究人员来说，似乎不容易获得具有清晰的轻链带（一种丝素蛋白亚基）的良好SDS-PAGE图谱。对于没有长时间电泳经验的初学者或学生来说尤其如此。问题出在哪儿？主要困难与SDS-PAGE技术本身无关，但与丝纤维制备液体丝素蛋白有关，以及丝素蛋白本身的独特性质。
丝蛋白是丝素蛋白和丝胶蛋白的总称。由成熟的家蚕幼虫纺成的两条平行单丝由65％-75％的丝心蛋白，20％-30％的丝胶蛋白和5％的蜡，色素，糖和其他杂质组成。丝素蛋白是一种结晶聚合物基纤维，被几层胶质蛋白包围。丝胶蛋白的最外层易溶于热水或沸水中。最接近丝心蛋白纤维的最内层丝胶蛋白几乎不溶于沸水（Wang和Zhang，2011）。所有分层的丝胶蛋白都易于溶解在碱性热水或沸水中。因此，在实验室中最常使用0.1％-0.5％Na ...
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| In vitro Autophosphorylation and Phosphotransfer Assay of Cyanobacterial Histidine Kinase 2
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Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] This is a detailed protocol of an autophosphorylation and phosphotransfer activities of Synechocystis sp. PCC 6803 full-length Histidine Kinase 2 (Hik2) protein described by Ibrahim et al., 2016. In this protocol, radioactively labelled ATP was used to study an autophosphorylation and phosphotransfer activity of the full-length Hik2 protein.
[摘要] 这是集胞藻的自磷酸化和磷酸转移活性的详细方案。在该方案中，使用放射性标记的ATP来研究全长Hik2的自磷酸化和磷酸转移活性，所述磷酸转移活性是由Ibrahim等人在2016年描述的。蛋白。
关键字：组氨酸激酶2，自身磷酸化，磷酸转移，Rre1，RppA，集胞藻。 PCC 6803
[背景] 蛋白磷酸化是发生在每个活生物体中的蛋白质的重要翻译后修饰。蛋白激酶（催化蛋白质磷酸化的酶）的活性首先由Burnett和Kennedy在1954年描述，其中它们通过肝酶显示酪蛋白的磷酸化（Burnett和Kennedy，1954）。然而，它的意义直到20世纪70年代和80年代才被欣赏（Cohen，2002）。可以使用偶联测定或直接用放射性标记的ATP研究磷酸γ-磷酸从ATP分子转移到蛋白质。基于掺入32 ...
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