| Detection of Protein Interactions in the Cytoplasm and Periplasm of Escherichia coli by Förster Resonance Energy Transfer
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Author:
Date:
2018-01-20
[Abstract] This protocol was developed to qualitatively and quantitatively detect protein-protein interactions in Escherichia coli by Förster Resonance Energy Transfer (FRET). The described assay allows for the previously impossible in vivo screening of periplasmic protein-protein interactions. In FRET, excitation of a donor fluorescent molecule results in the transfer of energy to an acceptor fluorescent molecule, which will then emit light if the distance between them is within the 1-10 nm range. Fluorescent proteins can be genetically encoded as fusions to proteins of interest and ...
[摘要] 该协议的开发是通过Förster共振能量转移（FRET）定性和定量检测大肠杆菌中的蛋白质 - 蛋白质相互作用。所描述的测定允许以前不可能的周质蛋白质 - 蛋白质相互作用的体内筛选。在FRET中，供体荧光分子的激发导致能量转移到受体荧光分子，如果它们之间的距离在1-10nm范围内，则受体荧光分子将发光。荧光蛋白质可以被遗传编码为与感兴趣的蛋白质的融合物并且在细胞中表达，因此FRET蛋白质 - 蛋白质相互作用实验可以在体内进行。供体和受体荧光蛋白融合体被构建用于被怀疑相互作用的细菌蛋白质。这些融合蛋白在细菌细胞中共表达，随后激发供体和受体通道测量荧光发射光谱。供体的发射光谱与受体的激发光谱之间的部分重叠是FRET的先决条件。即使在没有FRET的情况下，供体激发也可以使受体以已知百分比交叉激发。通过测量背景，仅供体和仅受体样品的参考光谱，可以计算预期的发射光谱。在预期光谱之上的受体的致敏发射可以归因于FRET，并且可以通过光谱解混来量化。
【背景】确定如何和哪些蛋白质相互作用维持生命是分子生物学研究的核心。存在许多体外方法，但可能导致误报，因为相互作用是从其生物学背景中取出的。 ...
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| Hydrogen Peroxide Measurement in Arabidopsis Root Tissue Using Amplex Red
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Author:
Date:
2016-11-05
[Abstract] This protocol describes the measurement of hydrogen peroxide (H2O2) content in Arabidopsis root tissue by using the Amplex® Red Hydrogen Peroxide/Peroxidase Assay Kit. When root tissue is disrupted and resuspended in phosphate buffer, H2O2 is released from the cells. The obtained root extracts containing H2O2 can be mixed with a solution containing Amplex® Red reagent (10-acetyl-3,7-dihydrophenoxazine). In the presence of horseradish peroxidase, the Amplex® Red reagent reacts with H2 ...
[摘要] 该方案描述了在拟南芥根组织中通过使用Amplex来测量过氧化氢（H 2 O 2 O 2）含量。 sup>红色过氧化氢/过氧化物酶测定试剂盒。当根组织被破坏并重新悬浮在磷酸盐缓冲液中时，H 2 O 2 O 2从细胞中释放。可以将获得的含有H 2 O 2 O 2的根提取物与含有Amplex Red试剂（10-乙酰基-3,7-二 - 。在辣根过氧化物酶的存在下，Amplex Red试剂与H 2 O 2以1:1的化学计量反应。所得产物是红色荧光化合物试卤灵，其可以通过荧光测定或分光光度法检测。我们的方案是基于Amplex ®红色过氧化氢/过氧化物酶测定试剂盒的手册，并描述了一步一步的程序，详细描述必要的控制和数据分析。我们还包括旨在帮助用户容易地用其自己的样品再现测定的方案，说明和实施例的修改。
[背景] 活性氧（ROS），例如H 2 O 2 O 2可以在该细胞是发育提示或应激条件的结果。在大量，ROS积累可能是有害的，通过造成细胞损伤。然而，增加的ROS产生也可以具有信号传导作用，并且作为控制下游细胞反应的第二信使。在植物中，对于许多非生物胁迫，例如干旱，盐度，温度胁迫和营养缺乏，已经显示ROS的信号传导作用（Mittler，2002; Mittler和Blumwald，2015; Xia等人）。 ，2015）。在我们最近的出版物Le ...
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