| Radioactive Tracer Feeding Experiments and Product Analysis to Determine the Biosynthetic Capability of Comfrey (Symphytum officinale) Leaves for Pyrrolizidine Alkaloids
|
|
Author:
Date:
2018-02-05
[Abstract] This protocol delivers a method to determine the biosynthetic capability of comfrey leaves for pyrrolizidine alkaloids independently from other organs like roots or flowers.
The protocol applies and combines radioactive tracer experiments with standard and modern techniques like thin layer chromatography (TLC), solid-phase extraction (SPE), high-performance liquid chromatography (HPLC) and gas chromatography-mass spectrometry (GC-MS).
[摘要] 该协议提供了一种方法来确定紫草叶生物合成能力的吡咯烷生物碱独立于其他器官，如根或花。
该协议将放射性示踪剂实验与薄层色谱法，固相萃取法，高效液相色谱法和气相色谱 - 质谱法等标准和现代技术相结合。
【背景】据了解，紫草根能够合成吡咯里西啶生物碱（Frölichet al。，2007），生物合成的关键酶高胡亚素合成酶（HSS）定位于内皮细胞。 除了这个合成位点之外，还有一些暗示，即某个发育阶段的叶子也许能够产生吡咯里西啶生物碱（Niemüller等人，2012）。 因此，开发一种方案来确定紫草叶合成吡咯里西啶生物碱的生物合成能力，以独立于其他植物器官。
|
|
|
| Cation (Ca2+ and Mn2+) Partitioning Assays with Intact Arabidopsis Chloroplasts
|
|
Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Determination of the relative distribution of Ca2+ and Mn2+ is an important tool for analyzing mutants showing altered levels of calcium and/or manganese transporters in the chloroplast envelope or thylakoid membrane. The method described in this protocol allows quantitative analyses of the relative distribution of calcium and manganese ions between chloroplast stroma and thylakoids using the isotopes [45Ca] and [54Mn] as radioactive tracers. To avoid contaminations with non chloroplastidic membrane systems, the method is designed for isolating pure ...
[摘要] 测定Ca 2 + 和Mn 2 + 的相对分布是分析在叶绿体包膜或类囊体中钙和/或锰转运蛋白水平发生变化的突变体的重要工具膜。该方案中描述的方法允许使用同位素[ 45 Ca]和[ 54 Mn]定量分析叶绿体基质和类囊体之间钙和锰离子的相对分布，作为放射性示踪剂。为了避免非叶绿体膜系统的污染，该方法被设计用于分离拟南芥的纯和完整的叶绿体。通过Percoll梯度离心分离完整的叶绿体。然后在轻孵育步骤期间使叶绿体吸收[ 45 Ca]或[ 54 Mn]。孵化后，叶绿体保持完整或渗透/机械处理以释放类囊体。通过液体闪烁计数可以确定掺入量[ 45 Ca]或[ 54 Mn]的量，并计算相对分布。
背景 钙和锰是光系统II的结构组分，形成无机Mn 4 O 5 O 5 O 3簇，其中水氧化发生电子，质子和分子氧的结果。通过叶绿体包膜和类囊体膜的Ca 2+ / +和/或超氧化物质是使得植物细胞满足PSII对这些阳离子的高需求的基本过程。在先前的研究中，使用来自豌豆植物的分离的类囊体膜（Ettinger等人）分析了Ca 2 + / H ...
|
|
|