3D Co-culture System of Tumor-associated Macrophages and Ovarian Cancer Cells
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Author:
Date:
2018-04-20
[Abstract] Ovarian cancer is fairly unique in that ovarian carcinoma cells can detach and spread directly through peritoneal cavity. It has been unclear, however, how detached cancer cells survive in the peritoneum and form spheroid structure. We have recently reported that there is a strong correlation between Tumor-associated macrophages (TAMs)-associated spheroid and clinical pathology of ovarian cancer, and that TAMs promote spheroid formation and tumor growth at early stages of transcoelomic metastasis in orthotopic mouse models. We have established an in vitro spheroid formation assay ...
[摘要] 卵巢癌相当独特,因为卵巢癌细胞可以通过腹膜腔直接分离和扩散。然而,目前还不清楚癌细胞如何在腹膜中存活并形成球状结构。我们最近报道,肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)相关的球状体与卵巢癌的临床病理学之间存在很强的相关性,并且TAMs在原位小鼠模型中促进球体形成和肿瘤生长在转移瘤体转移的早期阶段。我们已经建立了使用3D共培养系统的体外球体形成测定法,其中小鼠GFP + F4 / 80 + CD206 F 从含有卵巢癌的供体番茄lysM-cre小鼠的球状体中分离的TAM与在含有2%基质胶的培养基中的ID8细胞(TAM:ID8比例为1:10)混合并接种到用Matrigel预包被的24孔板上。由于transcoelomic转移也与许多其他癌症,如胰腺癌和结肠癌,TAM介导的球体形成实验将提供一个有用的方法来定义卵巢癌和其他transcoelomic转移癌症的分子机制和治疗目标。
【背景】在美国,卵巢癌(OC)是第二常见的妇科癌症和主要死亡原因(Jemal等人,2009; Siegel等人,2012年) )。 OC预后不良的主要原因是腹腔内和盆腔广泛植入转移,通常手术无法完全切除。对腹膜转移现象最广泛的解释是肿瘤细胞在延伸到腹膜表面后与原发肿瘤分离,并在腹膜内播种之前通过腹膜液输送到整个腹腔。有人提出,转移瘤的转移过程可分为几个步骤:1)细胞脱落,失巢凋亡的存活和抵抗; ...
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Infection of Caenorhabditis elegans with Vesicular Stomatitis Virus via Microinjection
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Author:
Date:
2017-11-20
[Abstract] Over the past 15 years, the free-living nematode, Caenorhabditis elegans has become an important model system for exploring eukaryotic innate immunity to bacterial and fungal pathogens. More recently, infection models using either natural or non-natural nematode viruses have also been established in C. elegans. These models offer new opportunities to use the nematode to understand eukaryotic antiviral defense mechanisms. Here we report protocols for the infection of C. elegans with a non-natural viral pathogen, vesicular stomatitis virus (VSV) through ...
[摘要] 在过去的15年中,线虫自由生活已经成为探索真核细菌和真菌病原体真核免疫的重要模型系统。 最近,使用天然或非天然线虫病毒的感染模型也已经在C中建立。线虫。 这些模型提供了使用线虫了解真核抗病毒防御机制的新机会。 在这里,我们报告感染的协议。 线虫与非天然病毒病原体,水泡性口炎病毒(VSV)通过显微注射。 我们还描述了编码荧光或萤光素酶报告基因的重组VSV毒株如何与简单的基于荧光,存活和发光的分析结合使用来鉴定宿主遗传背景,并对病毒感染有不同的易感性。
【背景】由于它的遗传易用性,体积小,文化价廉,透明的身体,自由生活的线虫秀丽隐杆线虫作为模式生物提供了许多优点。此外,C的易感性。线虫对人类多种细菌和真菌病原体的作用使得这种蠕虫成为研究微生物发病机制的有吸引力的系统(Zhang和Hou,2013; Cohen and Troemel,2015)。最近,发现了正义ssRNA奥赛病毒(OV)作为第一种天然的病毒病原体。线虫已经提示使用OV- C。 elegans 模型来定义线虫抗病毒防御机制(Felix等人,2011; Gammon,2017)。这些研究已经证明了线虫抗病毒RNA干扰途径组分如Dicer相关解旋酶1(DRH-1)在限制病毒复制中的明确作用(Ashe等人,2013)。
为了补充OV模型系统,我们最近报道了新一代病毒的产生。使用反义ssRNA水泡性口炎病毒(VSV)(Gammon等人,2017)的线虫模型。用VSV感染野生型(N2)蠕虫是致命的,虽然抗病毒反应(例如突变体,drh-1突变体)突变体缺陷会更快地感染感染(Gammon ...
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Fluorophore Labeling, Nanodisc Reconstitution and Single-molecule Observation of a G Protein-coupled Receptor
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Author:
Date:
2017-06-20
[Abstract] Activation of G protein-coupled receptors (GPCRs) by agonist ligands is mediated by a transition from an inactive to active receptor conformation. We describe a novel single-molecule assay that monitors activation-linked conformational transitions in individual GPCR molecules in real-time. The receptor is site-specifically labeled with a Cy3 fluorescence probe at the end of trans-membrane helix 6 and reconstituted in phospholipid nanodiscs tethered to a microscope slide. Individual receptor molecules are then monitored over time by single-molecule total internal reflection fluorescence ...
[摘要] 通过激动剂配体激活G蛋白偶联受体(GPCR)是通过从无活性受体构象向活性受体构象的转变来介导的。我们描述了一种新颖的单分子测定法,可以实时监测单个GPCR分子中的激活连锁构象转换。受体在跨膜螺旋6末端用Cy3荧光探针进行位点特异性标记,并在连接到显微镜载玻片的磷脂纳米圆盘中重构。然后通过单分子全内反射荧光显微镜随时间监测单个受体分子,显示无活性和活性样构象之间的自发转变。该测定提供关于无活性和活性受体构象的平衡分布以及构象交换的速率常数的信息。实验可以在不存在配体的情况下进行,显示负责基础信号传导活动的自发构象过渡,或者存在激动剂或反向激动剂配体,揭示配体如何改变受体的动力学刺激或抑制信号传导活性。所得到的机械信息对于改进的GPCR靶向药物的设计是有用的。单分子测定法在β2肾上腺素能受体的背景下进行了描述,但可扩展到多种GPCRs。 【背景】GPCR介导本地和远距离的细胞通讯,特别是内分泌系统。例如,细胞对激素如肾上腺素的反应是通过肾上腺素能受体介导的,其中β2肾上腺素能受体(β2AR)是突出的成员。 ...
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