| Examining Autophagy in Plant by Transmission Electron Microscopy (TEM)
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Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract] In plants, macroautophagy, here referred as autophagy, is a degradation pathway during which the double-membrane structure named autophagosome engulfs the cargo and then fuses with vacuole for material recycling.
To investigate the process of autophagy, transmission electron microscopy (TEM) was used to monitor the ultrastructure of autophagic structures and identify the cargo during this process due to its high resolution. Compared to other autophagy examination methods including biochemical assays and confocal microscopy, TEM is the only method that indicates the morphology of ...
[摘要] 在植物中，巨自噬，这里称为自噬，是一种降解途径，在此期间，称为自噬体的双膜结构吞噬货物，然后与液泡融合以进行材料回收。
为了研究自噬过程，透射电子显微镜（TEM）用于监测自噬结构的超微结构，并由于其高分辨率在此过程中识别货物。 与其他自噬检测方法（包括生化检测和共聚焦显微镜）相比，TEM是唯一能够显示纳米级自噬结构形态的方法，被认为是阐明自噬中间体形态和自噬基质的最佳方法之一。。 在这里，我们描述了使用TEM在 Nicotiana benthamiana >叶细胞中的自噬检测分析。
【背景】自噬是真核生物中高度保守的大分子降解途径（Dikic，2017）。在植物中，自噬是由几种胁迫条件诱导的，包括饥饿，氧化应激，盐胁迫和衰老（Doelling et al。>，2002; Hanaoka et al。>，2002; Liu et al。>，2005; Bassham，2007; Liu and Bassham，2009; Luo et al。>，2017）。在自噬期间，称为自噬体的双膜囊泡在细胞质中形成并转运到中央液泡中，其中自噬体的外膜与液泡膜融合。然后被称为自噬体的单膜结构进入液泡腔并最终降解（Ohsumi，2001; Liu和Bassham，2012）。
到目前为止，已经建立了许多检测植物自噬的方法。常用的检测方法是共聚焦显微镜，电子显微镜和生化方法。至于共聚焦显微镜检测，自噬标记包括与荧光蛋白融合的ATG8，ATG5和SH3P2用于标记自噬相关结构（Zhuang ...
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| An Optimized CTAB Method for Genomic DNA Extraction from Freshly-picked Pinnae of Fern, Adiantum capillus-veneris L.
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] As the sister clade of seed plants, ferns are significant materials for plant phylogeny research. However, the genomic DNA extraction protocol for fern samples like modified CTAB method still lacks robustness. Here, we found that the amount and condition of the pinnae samples are critical for gDNA extraction in fern, Adiantum capillus-veneris L. In 500 μl CTAB solution, the recommended amount of pinnae is about 10-20 mg (2-3 pieces). The condition of the pinnae must be instantly-picked from a plant cultivated in a suitable environment. With these factors under control, it is highly ...
[摘要] 作为种子植物的姐妹分支，蕨类植物是植物系统发育研究的重要材料。 然而，像改良CTAB方法的蕨类样品的基因组DNA提取方案仍然缺乏稳健性。 在这里，我们发现羽片样品的数量和条件对于蕨类植物， Adiantum capillus-veneris L中的gDNA提取至关重要。在500μlCTAB溶液中，推荐的羽片量约为10-20 mg（2-3片）。 必须从在合适环境中栽培的植物中立即采摘羽片的状况。 在控制这些因素的情况下，获得具有低降解率的高质量gDNA具有高度可重复性
【背景】CTAB方法已应用于 Adiantum capillus-veneris L的gDNA提取（Han et al 。，2012; Li et al 。，2017年）。 然而，该方案在我们的实验中仍显示出不稳定性和高降解率。 蕨类植物的羽片积聚了大量的次级代谢产物，如多糖和多酚，这对DNA提取不利（Ponnusamy et al。，2015）。
为了提高gDNA提取的稳健性，我们基本上从两个方面对协议进行了优化：1）减少材料用量，仅使用2-3个羽片（约10-20毫克）。 2）必须从在适宜的培养环境（温度：25℃，湿度：65％，16小时白光/ 8小时黑暗处理）中培养的植物中新鲜采摘羽片，并立即用于DNA提取。 ...
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| A Modified Approach for Axenic Cultivation of Spores of Fern Adiantum capillus-veneris L. with High Germination Rate
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Author:
Date:
2018-07-05
[Abstract] Spores are the primary way of spread and reproduction for ferns, a clade of seed-free vascular plants. However, no detailed protocol for ferns spore cultivation has been reported yet. Here we provide a modified approach for axenic cultivation of fern Adiantum capillus-veneris L., based on Cao’s and Li’s method (Cao, et al., 2010; Li, et al., 2013).
Our approach can be briefly divided into four steps: 1) collect spores; 2) sterilize the spores with 5% sodium hypochlorite solution and wash twice; 3) incubate the spores in liquid Knop’s medium in the dark ...
[摘要] 孢子是蕨类植物（一种无种子维管植物的分支）的传播和繁殖的主要方式。 然而，尚未报道蕨类植物孢子培养的详细方案。 在这里，我们提供了一种基于Cao和Li的方法（Cao，等，，2010; Li， et al。，2013）。
我们的方法可以简单地分为四个步骤：1）收集孢子; 2）用5％次氯酸钠溶液对孢子进行灭菌，洗涤两次; 3）在黑暗中将液体Knop培养基中的孢子培养5天; 4）在Knop的平板培养基上培养孢子。 为了提高发芽率，我们将灭菌时间限制在25分钟以下，并在孢子灭菌后加入黑暗处理步骤。 经过这些改良后，发芽率从2％提高到25％。
【背景】在植物的系统发育树中，蕨类植物是陆地植物的关键分支，因为它们是种子植物的姐妹谱系。蕨类植物具有独特的生命周期特征。与种子植物相比，蕨类植物的孢子体带有孢子而不是种子。在有利条件下，孢子萌发形成配子体，其中某些区域（肋骨）上的细胞专门生殖生殖器官以产生配子。在水依赖性受精后，新生孢子体出现并且蕨类植物的整个生命周期完成（Li et al。，2013）。因此，为了研究蕨类植物的有性生殖过程和生活史，在实验条件下进行孢子培养是必要的。
然而，可用于蕨类植物孢子培养的方案是不充分的。在此，我们选择 Adiantum capillus-veneris ...
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