Whole-mount Immunohistochemistry of Adult Zebrafish Retina for Advanced Imaging
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Author:
Date:
2020-12-20
[Abstract] Immunohistochemistry is a widely used technique to examine the expression and subcellular localization of proteins. This technique relies on the specificity of antibodies and requires adequate penetration of antibodies into tissues. The latter is especially challenging for thick specimens, such as embryos and other whole-mount preparations. Here we describe an improved method of immunohistochemistry for retinal whole-mount preparations. We report that a cocktail of three reagents, Triton X-100, Tween-20, and DMSO, in blocking and antibody dilution buffers strongly enhances immunolabeling in ...
[摘要] Abstra CT ]免疫组织化学是一种广泛使用的技术来检验表达和蛋白质的亚细胞定位。该技术依赖于抗体的特异性,并且需要抗体充分渗透到组织中。对于厚的标本,例如胚胎和其他整装样品,后者尤其具有挑战性。在这里,我们描述了一种用于视网膜整装制剂的免疫组织化学的改进方法。我们报告说,三种试剂鸡尾酒,曲通X - 封闭和抗体稀释缓冲液中的100,Tween-20和DMSO强烈增强了成年斑马鱼整个视网膜中的免疫标记。此外,我们建立了在整个视网膜组织中,基于柠檬酸盐缓冲液的经典表位检索方法,可以有效地免疫标记膜相关蛋白。总的来说,这种简单的修饰可以对视网膜整装中的蛋白质进行精确且可重复的免疫标记。
[背景]为了理解复杂的生物过程,形态学和组织学分析能够进行切合实际的定性和quantitativ ë接近。免疫组织化学是一种用于可视化细胞内和细胞外蛋白表达和定位的强大技术。尽管常规组织学切片可提供高分辨率的免疫染色蛋白图像,但对3维组织进行切片会导致组织结构保存不佳。在各节中,不容易理解完整的细胞结构和对蛋白质3维分布的完整理解。相反,整装制剂可提供大量3D信息,包括完整的细胞结构以及复杂组织中细胞和分子的空间关系。然而,使免疫组织化学适合与完整组织一起使用通常会导致抗体的渗透性差,导致标记不完全和高度的非特异性背景。
在视网膜,径向M的细胞体ü米勒胶质细胞跨度视网膜的整个厚度(Bringmann等人,2006)。小胶质细胞是中枢神经系统的先天免疫细胞,具有小的细胞体和分叉的过程,分布在整个视网膜实质中(Li等人,2015; ...
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Optogenetic Mapping of Synaptic Connections in Mouse Brain Slices to Define the Functional Connectome of Identified Neuronal Populations
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Date:
2017-01-05
[Abstract] Functional connectivity in a neural circuit is determined by the strength, incidence, and neurotransmitter nature of its connections (Chuhma, 2015). Using optogenetics the functional synaptic connections between an identified population of neurons and defined postsynaptic target neurons may be measured systematically in order to determine the functional connectome of that identified population. Here we describe the experimental protocol used to investigate the excitatory functional connectome of ventral midbrain dopamine neurons, mediated by glutamate cotransmission (Mingote et al., ...
[摘要] 神经回路中的功能连通性由其连接的强度,发病率和神经递质特性决定(Chuhma,2015)。使用光遗传学,可以系统地测量识别的神经元群体和定义的突触后靶神经元之间的功能性突触连接,以便确定该识别群体的功能性连接群。这里我们描述了用于研究由谷氨酸共转播介导的腹侧中脑多巴胺神经元的兴奋性功能性连接体的实验方案(Mingote等,2015)。通过将编码通道视紫红质(ChR2)的腺相关病毒(AAV)注射到DATIREScre小鼠的腹侧中脑中,使多巴胺神经元变得光敏。多巴胺合成酶酪氨酸羟化酶的免疫荧光证实ChR2表达在多巴胺神经元中的功效和特异性。然后,切片膜片钳记录由接受多巴胺神经元投影的区域中的神经元产生,并且确定兴奋性连接的发生率和强度。所有接受多巴胺神经元投射的区域的连接发生率和强度的总结构成功能性连接体。 【背景】为了建立特定神经回路的功能,有必要确定解剖连接,解剖连接的映射及其功能连接,连接的强度,发病率和神经递质性质的映射。使用单因素限制的病毒性突触后追踪技术,可以描述包括多巴胺系统在内的神经回路的复杂解剖连接(Callaway and Luo,2015; ...
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