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Date:
2017-04-05
[Abstract] The Actin-Related Protein 2/3 (ARP2/3) complex is an actin nucleator that generates a branched actin network in mammalian cells. In addition to binding nucleation promoting factors, LeClaire et al. demonstrated that its phosphorylation state is essential key for its activity (LeClaire et al., 2008). In cells, the ARP2/3 complex is phosphorylated on threonine and tyrosine residues of the ARP2, ARP3, and ARPC1 subunits (Vadlamudi et al., 2004; LeClaire et al., 2008; Narayanan et al., 2011; LeClaire et al., 2015). In particular, ...
[摘要] 肌动蛋白相关蛋白2/3(ARP2 / 3)复合物是在哺乳动物细胞中产生支链肌动蛋白网络的肌动蛋白成核剂。除了结合成核促进因子之外,LeClaire等人。证明其磷酸化状态是其活性的关键(LeClaire等人,2008)。在细胞中,ARP2 / 3复合物在ARP2,ARP3和ARPC1亚基的苏氨酸和酪氨酸残基上磷酸化(Vadlamudi等人,2004; LeClaire等人)。 ,2008; Narayanan等人,2011; LeClaire等人,2015)。特别地,ARP2亚基的苏氨酸237和238的磷酸化对于允许将ARP2 / 3复合物结构改变为其活性构象是必要的(Narayanan等人,2011; LeClaire等人al ,2015)。虽然对于真核细胞中的许多功能很重要,但ARP2 / 3复合物活性也有利于多种细胞病原体(Haglund和Welch,2011; Welch和Way,2013)。最近,我们证明细菌病原体,嗜肺军团菌,使用注射在宿主细胞质细胞中的细菌蛋白激酶来操纵ARP2 / 3复合磷酸化状态(Michard等人,2015) )。在这里,我们描述如何测试细菌蛋白激酶或另一种蛋白激酶在体外上下文中磷酸化ARP2 / 3复合物的能力。首先,产生和纯化ARP2 / 3复合物和细菌蛋白激酶。然后,将纯化的蛋白质在ATP存在下培养,并通过Western印迹分析ARP2 / ...
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Date:
2016-12-20
[Abstract] In plant cells, galactolipids are predominant, representing up to 50% of the lipid content in photosynthetic tissues. Galactolipid synthesis is initiated by MGDG synthases (MGDs), which use UDP-galactose as a donor sugar and diacylglycerol (DAG) as acceptor, to form monogalactosyldiacylglycerol (MGDG). This protocol is used to produce a recombinant form of Arabidopsis thaliana (A. thaliana) monogalactosyldiacylglycerol synthase 1 (MGD1) protein, in Escherichia coli (E. coli), using a two-step chromatographic purification procedure. The protein is easily ...
[摘要] 在植物细胞中,半乳糖脂是主要的,代表高达光合组织脂质含量的50%。通过使用UDP-半乳糖作为供体糖和二酰基甘油(DAG)作为受体的MGDG合成酶(MGD)启动半乳糖脂合成以形成单糖基二酰基甘油(MGDG)。该方案用于在大肠杆菌中产生拟南芥(Arabidopsis thaliana)(拟南芥)单糖半乳糖二酰基甘油合酶1(MGD1)蛋白的重组形式(大肠杆菌),使用两步色谱纯化方法。蛋白质容易表达和纯化至数量,适用于生物化学和结构研究。还描述了MGD1的结晶。
背景 以前在e中表达植物MGD的尝试。大肠杆菌显示约99%的重组蛋白质积累在包涵体中(Miège等,1999)。开发了使用洗涤剂或体外包涵体折叠方案的细菌膜的溶解,并产生足够的纯和活性级分,足以监测酶的活性,但不进行其结构研究(Nishiyama et ...
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