| Polyamine Transport Assay Using Reconstituted Yeast Membranes
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Author:
Date:
2021-01-20
[Abstract] ATP13A2/PARK9 is a late endo-/lysosomal P5B transport ATPase that is associated with several neurodegenerative disorders. We recently characterized ATP13A2 as a lysosomal polyamine exporter, which sheds light on the molecular identity of the unknown mammalian polyamine transport system. Here, we describe step by step a protocol to measure radiolabeled polyamine transport in reconstituted vesicles from yeast cells overexpressing human ATP13A2. This protocol was developed as part of our recent publication (van Veen et al., 2020) and will be useful for characterizing the transport function of ...
[摘要] [摘要] ATP13A2 / PARK9是一种晚期内/溶酶体P5B转运ATPase，与多种神经退行性疾病有关。我们最近将ATP13A2表征为溶酶体多胺出口者，这为未知的哺乳动物多胺转运系统的分子身份提供了线索。在这里，我们逐步描述了从过量表达人ATP13A2的酵母细胞中测量重组囊泡中放射性标记的多胺转运的方案。该方案是我们最新出版物的一部分（van Veen等，2020），将有助于表征其他假定的多胺转运蛋白的转运功能，例如P5B转运ATPase的同工型。
[背景] ATP13A2 / PARK9编码一种普遍表达的晚期内-/溶酶体膜蛋白，与一系列神经退行性疾病有关，例如早发性帕金森氏病（Di Fonzo等，2007 ；Lin等，2008）和Kufor -Rakeb综合征（伴痴呆的早期帕金森病）（Ramirez等，2006 ；Park等，2011）。ATP13A2属于P型转运ATPase ，是一类活性转运蛋白，由于ATP水解而暂时形成磷酸中间产物（Kuhlbrandt ，2004年）。ATP13A2是P5亚家族的成员，该家族已在20多年前通过基因组测序鉴定出来（Axelsen和Palmgren ...
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| Determining Efficiency and Selectivity of Lipid Extraction by Perturbing Agents from Model Membranes
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] Several membrane-perturbing agents extract lipids from membranes and, in some cases, this lipid efflux is lipid specific. In order to gain a better description of this phenomenon and to detail the intermolecular interactions that are involved, a method has been developed to characterize the extent and the specificity of membrane-lipid extraction by perturbing agents. A perturbing agent is incubated with model membranes existing as multilamellar vesicles (MLVs) and subsequently, the remaining MLVs and the small lipid/perturbing agent complexes resulting from the extraction are isolated and ...
[摘要] 几种膜干扰剂从膜提取脂质，并且在一些情况下，该脂质外排是脂质特异性的。为了更好地描述这种现象并详细描述所涉及的分子间相互作用，已经开发了一种方法来表征通过扰动剂提取膜 - 脂质的程度和特异性。将扰动剂与作为多层囊泡（MLV）存在的模型膜一起孵育，随后分离并分析从提取得到的剩余MLV和小脂质/扰动剂复合物，以评估脂质提取的程度和特异性。 br />
[背景] 几种膜干扰剂从膜中提取脂质;这些包括蛋白质，肽和洗涤剂。这些脂质提取中的几种是生物学中的基本过程。在某些情况下，该过程是致命的;这是从细菌膜提取脂质导致细胞死亡的一些抗菌剂的情况（Bechinger，2014; Schaefer等人，2014）。在其他系统中，这个过程是至关重要的。例如，ApoA1是结合细胞并提取磷脂和胆固醇以形成新生高密度脂蛋白（HDL）的蛋白质，这是反向胆固醇转运的关键，因此在控制动脉粥样硬化中起关键作用（Strömstedt et al 。，2010）。已经表明，这些脂质提取物中的一些是脂质特异性的;换句话说，提取级分的脂质组成不同于原始膜的脂质组成。预期这种特异性将更经常地考虑脂质组学的最近进展而报告。一般来说，这些诱导的脂质流出的脂质特异性很差地表征，尽管它在生物过程中起关键作用。我们最近已经显示选择性脂质流出取决于与膜的特异性相互作用（Therrien等人，2013; ...
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