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Microcentrifuge

Centrifuge 5424/ 5424 R

公司名称: Eppendorf
产品编号: 5424 R
Bio-protocol()
Company-protocol()
Other protocol()

Single-run HPLC Quantification of Plant Cell Wall Monosaccharides
Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract]  The plant cell wall is a complex network of polysaccharides and proteins that provides strength and structural integrity to plant cells, as well as playing a vital role in growth, development, and defense response. Cell wall polysaccharides can be broadly grouped into three categories: cellulose, pectins, and hemicelluloses. Dynamic interactions between polysaccharides and cell wall-associated proteins contribute to regions of flexibility and rigidity within the cell wall, allowing for remodeling when necessary during growth, environmental adaptation, or stress response activation. These ... [摘要]  [摘要] 植物细胞壁是由多糖和蛋白质组成的复杂网络,可为植物细胞提供强度和结构完整性,并且在生长,发育和防御反应中起着至关重要的作用。细胞壁多糖可大致分为三类:纤维素,果胶和半纤维素。多糖和细胞壁相关蛋白之间的动态相互作用有助于细胞壁内的柔韧性和刚性区域,从而在生长,环境适应或应激反应激活过程中在必要时进行重塑。这些多糖相互作用对于植物生长至关重要,但是它们也增加了植物的难度。 在尝试分析细胞壁结构和组成时进行了反驳。过去,已经使用冗长的方案来量化对纤维素有贡献的细胞壁单糖以及中性和酸性细胞壁多糖。近来,STREA 毫升为单糖定量描述INED方法。该方案结合了简化的水解方法,随后进行了多次运行的高性能阴离子交换色谱和脉冲安培检测(HPAEC-PAD)。在这里,我们介绍了该协议的更新版本,其中我们可以在单个高效液相色谱HPAEC-PAD梯度曲线中分析所有九种细胞壁单糖。包括酶促淀粉降解以及替代的内部标准以提高定量准确性,以及便于数据分析的即用型Python脚本为该协议增加了广泛的应用范围。该方案用于分析拟南芥的浅色幼苗和深色的胚轴,但适用于任何植物组织。

[背景] ...

Generation of Gene Knockout and Gene Replacement with Complete Removal of Full-length Endogenous Transcript Using CRISPR-Trap
Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract]  This protocol describes the application of the CRISPR-Trap from designing of the gene targeting strategy to validation of successfully edited clones that was validated on various human cell lines, among them human induced pluripotent stem cells (hiPSCs). The advantage of CRISPR-Trap over conventional approaches is the complete removal of any endogenous full-length transcript from the target gene. CRISPR-Trap is applicable for any target gene with no or little coding sequence in its first exon. Several human cell lines and different genes have so far been edited successfully with CRISPR-Trap. [摘要]  该协议描述了CRISPR-Trap从设计基因靶向策略到验证成功编辑的克隆的应用,所述克隆在各种人细胞系上得到验证,其中人类诱导的多能干细胞(hiPSC)。 CRISPR-Trap优于常规方法的优点是从靶基因完全去除任何内源全长转录物。 CRISPR-Trap适用于在其第一个外显子中没有编码序列或编码序列很少的任何靶基因。 到目前为止,已经使用CRISPR-Trap成功编辑了几种人细胞系和不同基因。

【背景】CRISPR / Cas9技术的出现促进了基因敲除和基因编辑的基因组靶向。执行敲除的常规方法依赖于引入移码导致过早终止密码子(PTC),截短开放阅读框(ORF)以及随后通过无义介导的mRNA衰变(NMD)降解靶基因的转录物。 。这种方法的一个可能的缺陷是全长转录物,其可以逃避NMD并产生具有残余或甚至显性负功能的C末端截短蛋白。该协议提出了CRISPR-Trap,这是我们最近建立的一种方法(Reber et al。>,2018),成功编辑后将阻止从靶基因位点表达任何全长转录本(图1)。简而言之,这种方法针对CRISPR / ...

Nuclear/Cytoplasmic Fractionation of Proteins from Caenorhabditis elegans
Author:
Date:
2018-10-20
[Abstract]  C. elegans is widely used to investigate biological processes related to health and disease. To study protein localization, fluorescently-tagged proteins can be used in vivo or immunohistochemistry can be performed in whole worms. Here, we describe a technique to localize a protein of interest at a subcellular level in C. elegans lysates, which can give insight into the location, function and/or toxicity of proteins. [摘要]  ℃。 线虫>广泛用于研究与健康和疾病相关的生物过程。 为了研究蛋白质定位,荧光标记的蛋白质可用于体内>或免疫组织化学可在整个蠕虫中进行。 在这里,我们描述了一种在 C中亚细胞水平定位感兴趣的蛋白质的技术。 线虫>裂解物,可以洞察蛋白质的位置,功能和/或毒性。
【背景】亚细胞分级已用于不同的模式生物中以鉴定和研究细胞核,细胞膜和细胞质中的蛋白质功能。 例如,当聚集倾向蛋白定位于细胞核或细胞质中时,它们的毒性可能更大(Kontopoulos et al。>,2006; Barmada et al。>,2010)。 在这里,我们提供了一个协议(改编自Chen et al。>,2000和La Rocca et al。>,2007)来定位的细胞核和细胞质组分中的特定蛋白质。>℃。线虫>。

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