| Direct Reprogramming of Mouse Embryonic Fibroblasts to Conventional Type 1 Dendritic Cells by Enforced Expression of Transcription Factors
|
|
Author:
Date:
2020-05-20
[Abstract] Ectopic expression of transcription factor combinations has been recently demonstrated to reprogram differentiated somatic cells towards the dendritic cell (DC) lineage without reversion to a multipotent state. DCs have the ability to induce potent and long-lasting adaptive immune responses. In particular, conventional type 1 DCs (cDC1s) excel on antigen cross-presentation, a critical step for inducing CD8+ T cell cytotoxic responses. The rarity of naturally occurring cDC1s and lack of in vitro methodologies for the generation of pure cDC1 populations strongly hinders the ...
[摘要] [摘要] 转录因子组合的异位表达最近被证明可以将分化的体细胞重编程为树突状细胞（DC）谱系，而不会回复到多能状态。DC具有诱导有效和持久的适应性免疫应答的能力。在特定的常规类型1的DC（cDC1s）练成抗原交叉呈递，用于诱导CD8的关键步骤+ T细胞的细胞毒性应答。天然存在的cDC1的稀有性和缺乏用于生成纯cDC1群体的体外方法论，严重阻碍了对cDC1谱系规格和功能的研究。在这里，我们描述了用于生成感应DC（iDC）的协议 慢病毒介导的转录因子PU.1，IRF8和BATF3在小鼠胚胎成纤维细胞中的表达。iDC 在9天内获得DC形态，cDC1表型和转录特征。使用此协议生成的iDC 具有对炎症刺激，吞噬死细胞，将抗原加工并交叉呈递给CD8 + T细胞的功能。DC重新编程提供了一个简单易处理的系统，可以生成大量的cDC1类细胞用于高内涵筛选，从而开辟了新途径，可以更好地了解cDC1的规格和功能。将来，在成纤维细胞中忠实诱导cDC1命运可能会导致产生患者特定的疫苗接种DC。
[背景技术树突状细胞（DC）是专业的抗原呈递细胞，专门用于识别，加工和呈递T细胞抗原，在诱导适应性免疫应答和免疫记忆中起关键作用（Me rad 等，2013）。DC可以分为4个主要子集：浆细胞样DC（pDC ），大量1型干扰素的产生者，循环单核细胞衍生的单核细胞衍生DC 和常规DC（cDC ...
|
|
|
| Quantitative Live-cell Reporter Assay for Noncanonical Wnt Activity
|
|
Author:
Date:
2018-03-20
[Abstract] Noncanonical Wnt signaling functions independently of the β-catenin pathway to control diverse developmental processes, and dysfunction of the pathway contributes to a number of human pathological conditions, including birth defects and metastatic cancer. Progress in the field, however, has been hampered by the scarcity of functional assays for measuring noncanonical Wnt signaling activity. We recently described the Wnt5a-Ror-Kif26b (WRK) reporter assay, which directly monitors a post-transcriptional regulatory event in noncanonical Wnt signaling. In this protocol, we describe the generation ...
[摘要] 非经典Wnt信号独立于β-catenin途径发挥功能来控制不同的发育过程，并且该途径的功能障碍导致许多人类病理状况，包括出生缺陷和转移性癌症。 然而，该领域的进展一直受到用于测量非典型Wnt信号活性的功能测定的稀缺性的阻碍。 我们最近描述了Wnt5a-Ror-Kif26b（WRK）记者测定法，其直接监测非典型Wnt信号传导中的转录后调节事件。 在该协议中，我们描述了通过流式细胞术检测和测量活细胞中Wnt5a信号传导活性的稳定GFP-Kif26b报告细胞系和定量记者测定法的产生。
【背景】从历史上看，转录报告基因检测方法促进了主要信号通路的描述。具体来说，β-连环蛋白依赖性萤光素酶或基于GFP的转录报道基因有助于阐明经典Wnt /β-连环蛋白途径的分子机制（Korinek et al。，1997; Fuerer and Nusse，2010）。尽管已经描述了许多基于JNK依赖性转录的非经典Wnt信号传导报道分子，但是这些转录应答是否是非经典Wnt信号传导的主要或次要仍不清楚（Veeman等，2003; Nishita等，等，2010; Ohkawara和Niehrs，2011）。此外，用于实时检测非转录性Wnt5a-Ror信号传导事件的记者尚未获得。 ...
|
|
|
| Primary Culture System for Germ Cells from Caenorhabditis elegans Tumorous Germline Mutants
|
|
Author:
Date:
2017-08-05
[Abstract] The Caenorhabditis elegans germ line is an important model system for the study of germ stem cells. Wild-type C. elegans germ cells are syncytial and therefore cannot be isolated in in vitro cultures. In contrast, the germ cells from tumorous mutants can be fully cellularized and isolated intact from the mutant animals. Here we describe a detailed protocol for the isolation of germ cells from tumorous mutants that allows the germ cells to be maintained for extended periods in an in vitro primary culture. This protocol has been adapted from Chaudhari et al. ...
[摘要] 秀丽隐杆线虫种系是胚芽干细胞研究的重要模型系统。 野生型C。 线虫生殖细胞是合胞体，因此不能在体外培养中分离。 相比之下，来自肿瘤突变体的生殖细胞可以完全被细胞化并从突变动物中完整分离。 在这里，我们描述了从肿瘤突变体中分离生殖细胞的详细方案，其允许生殖细胞在体外原代培养中长时间维持。 该协议已从2016年Chaudhari等人改编。
【背景】秀丽生殖细胞在位于两个性腺臂的远端区域的两个成体干细胞龛中产生（Hansen和Schedl，2013; Kimble和Seidel，2013）。在野生型雌雄同体中，有丝分裂生殖细胞仅限于性腺臂的远端，干细胞生态位。野生型生殖细胞是合胞体，并且包含延伸通过性腺臂中心区域的共同细胞质的开口。 ℃。线虫肿瘤种系突变体在整个性腺中增加了生殖细胞的有丝分裂增殖。我们发现肿瘤种系突变体通常具有完整的细胞生殖细胞，其含有完整的质膜（Chaudhari等人，2016）。这种细胞化允许生殖细胞的分离及其在培养中的维持。该方案描述了分离和维持培养物中肿瘤突变体的生殖细胞的方法学和组织培养基。虽然已经描述了用于C的主要培养物的培养基。 elegans 胚胎和幼虫细胞（Strange等人，2007; Zhang和Kuhn，2013），生殖细胞在这种培养基中不能存活（Chaudhari等人。 ...
|
|
|