| A Triple-challenge Mouse Model of Allergic Airway Disease, Primary Influenza Infection, and Secondary Bacterial Infection
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Author:
Date:
2020-04-20
[Abstract] Asthma is a global problem that affects millions of individuals. An increased risk of respiratory viral and bacterial infections is one of the complications of asthma. We recently reported that mice with ovalbumin-induced allergic airway disease (AAD) are protected against influenza-Streptococcus pneumoniae co-infection. Here, we describe in detail a protocol on how to induce AAD and influenza-S. pneumoniae co-infection in mice and to evaluate the specific roles of asthma on immunity to viral and bacterial pathogens in the hope of translating findings to benefit asthmatic ...
[摘要] [摘要] 哮喘是一个全球性问题，影响着数以百万计的人。呼吸道病毒和细菌感染的风险增加是哮喘的并发症之一。我们最近报道说，患有卵白蛋白诱发的过敏性气道疾病（AAD）的小鼠可以预防流行性感冒肺炎链球菌合并感染。在这里，我们详细描述议定书中关于如何诱导AAD和流行性感冒肺炎链球菌合并感染的小鼠并要评估的具体作用哮喘在抗干扰性病毒和细菌病原体的希望翻译发现以使哮喘患者受益。
[背景] 全球患病个体与哮喘的增加，随着300亿目前的痛苦和额外的100万个新发生率预测到2025年（生菜等，2017） 。由于中改变的免疫系统，哮喘的个体被认为具有风险增加易感性的流感感染的季节性和大流行性流感感染可导致并发Bacteri 铝感染可导致气道呼吸窘迫综合征，潜在的危及生命的疾病（Gilca 等，2011） 。无论是否哮喘病是在最近的2009年H1N1大流行期间，哮喘患者更容易因流感住院，但临床数据也表明哮喘患者死亡或需要ICU的可能性较小与没有哮喘的人相比，流感大流行期间大多数死亡不是由每次入院的病毒感染引起的。本身，但实际上是由于继发细菌感染引起的并发症（Morens 等人，2008; MacIntyre 等人，2018）。我们先前曾报道患有AAD的小鼠对流感病毒或肺炎链球菌的单次感染具有抗性（Furuya 等人，2015； Sanfilippo ...
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| Modifying Styrene-maleic Acid Co-polymer for Studying Lipid Nanodiscs by Direct Fluorescent Labeling
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] This protocol was developed to functionalize styrene maleic acid (SMA) by direct fluorescent labeling in an easy way, accessible to biochemistry laboratories. This novel method is based on the coupling of carboxylic acids to primary amines using a carbodiimide, a reaction commonly used for protein chemistry. The procedure uses the hydrolyzed styrene-maleic acid copolymer and occurs entirely in aqueous solution with mild conditions compatible with many biomolecules.
[摘要] 该协议旨在通过直接荧光标记以简单的方式使苯乙烯马来酸（SMA）功能化，生物化学实验室可以使用。 该新方法基于使用碳二亚胺（一种常用于蛋白质化学的反应）将羧酸偶联到伯胺上。 该方法使用水解的苯乙烯 - 马来酸共聚物并且完全在水溶液中发生，具有与许多生物分子相容的温和条件。
【背景】膜蛋白体外的表征可能非常具有挑战性（Grisshammer和Tate，1995）。除了过度表达和膜分离的困难之外，还需要从其天然环境中提取膜蛋白。必需的溶解步骤通常需要使用去污剂来代替天然脂质环境，这通常会导致膜蛋白的结构和/或活性的丧失（Duquesne 等人，2016）。出于这个原因，已经开发了几种替代选择，例如amphipols（Popot，2010），以避免与洗涤剂相关的一些困难并保持膜蛋白的溶解度。几年前，苯乙烯马来酸（SMA）共聚物更常用作低分子量洗涤剂策略的替代品（Dorr et al。，2014; Jamshad et al。 ，2015; Prabudiansyah et al。，2015）。已经证明SMA能够自发地溶解生物膜并产生平均尺寸为10nm的圆盘形颗粒。这些纳米圆盘（称为SMALP）含有嵌入来自膜和SMA共聚物的脂质中的蛋白质混合物，将颗粒保持在溶液中（Knowles 等人，，2009）。 ...
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| In vitro Nitrate Reductase Activity Assay from Arabidopsis Crude Extracts
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Date:
2018-04-05
[Abstract] Nitrate reductase (NR) reduces the major plant nitrogen source, NO3-, into NO2-. NR activity can be measured by its final product, nitrite through its absorbance under optimized condition. Here, we present a detailed protocol for measuring relative enzyme activity of NR from Arabidopsis crude extracts. This protocol offers simple procedure and data analysis to compare NR activity of multiple samples.
[摘要] 硝酸还原酶（NR）将主要的植物氮源NO 3 N-2还原为NO 2 - 2。 NR活性可以通过其最终产物，亚硝酸盐在最佳条件下通过其吸光度来测量。 在这里，我们提供了一个详细的协议，用于测量来自拟南芥粗提物的NR的相对酶活性。 该协议提供简单的程序和数据分析来比较多个样品的NR活性。
【背景】氮是植物所需的主要营养素，主要以硝酸盐的形式吸收。硝酸还原酶是高等植物中首次同化氮的酶。植物硝酸还原酶的同型二聚体如下催化硝酸根的NAD（P）H依赖性还原为亚硝酸根：
NO <3> + NADH + H +→NO - + NAD + H 测量NR活性的方法可能是研究影响NR活性的生物因素的有力工具（Park等人，2011）。氮同化影响植物中氨基酸的含量，因此调节NR活性可用于提高某些作物的质量（Croy和Hageman，1970; Dalling和Loyn，1977; Ruan等人，1998） ）。在该协议中，在优化的缓冲液条件下限制时间内亚硝酸盐浓度增加作为可比值获得。亚硫酸盐浓度通过Griess测定法通过其在540nm处的吸光度来测量。简言之，亚硝酸盐与磺胺酸形成重氮盐，然后N-（1-萘基）乙二胺二盐酸盐形成有色偶氮化合物。可以比较这些值以确定样品如何具有不同的NR活性。此外，通过简单的过程可以将这些数值转换为精确增加的亚硝酸盐浓度。 ...
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