|
Author:
Date:
2016-12-05
[Abstract] Metallocarboxypeptidases (MCP) are zinc-dependent exopeptidases that catalyze the hydrolysis of C-terminal amide bonds in proteins and peptides. They are involved in a wide range of physiological processes and have recently emerged as relevant drug targets in biomedicine (Arolas et al., 2007). In this context, the study and discovery of new MCP inhibitors from plants constitute a valuable approach for the development of new therapeutic strategies. Herein we describe a simple and accessible microplate method for the study of the specific and dose-response carboxypeptidase A inhibitory ...
[摘要] 金属羧肽酶（MCP）是锌依赖性外肽酶，其催化蛋白质和肽中的C-末端酰胺键的水解。它们参与多种生理过程，并且最近作为生物医学中的相关药物靶标出现（Arolas等人，2007）。在这种情况下，从植物研究和发现新的MCP抑制剂构成了开发新的治疗策略的有价值的方法。在这里我们描述一种简单和可访问的微孔板方法研究特定和剂量反应羧肽酶A抑制活动存在于安第斯马铃薯块茎。我们的协议结合了针对植物组织中的小蛋白抑制剂优化的提取方法，使用酶标仪测量酶动力学。这些仪器能够在很短的时间内读取小样品体积，因此减少了高通量筛选实验的时间和成本。虽然本协议描述了安第斯土豆的研究，我们的方法也适用于分析其他植物样品。
关键字：金属羧肽酶，羧肽酶A，抑制剂，抑制活性，微孔板测定，土豆
[背景] 蛋白质蛋白酶抑制剂是作为其防御昆虫攻击的防御系统的一部分产生的伤口诱导分子（Graham等人，1981; Villanueva等人，1998）。在研究的抑制剂中，只有两种对MCP具有特异性，即，马铃薯羧肽酶抑制剂（PCI）及其在番茄植物（TCI）中发现的紧密同源物。在过去几十年中，Solanaceae中MCP抑制剂的存在已被广泛报道，揭示马铃薯（马铃薯）作为MCP抑制剂的最重要来源之一（Hass等人， ，1979;Obregón等人，2012; ...
|
|
Author:
Date:
2016-11-05
[Abstract] This protocol can be used to inhibit the biosynthesis of polyamines, specifically putrescine, in tomato plants grown with NH4+ as a solely N source. In general, polyamines are positively charged small metabolites implicated in physiological processes, including organogenesis, embryogenesis, floral initiation and development, leaf senescence, pollen tube growth, fruit development and ripening and participate in the response to abiotic and biotic stresses (Tiburcio et al., 2014). Polyamines are synthesized from amino acids by decarboxylation of ornithine or ...
[摘要] 该方案可用于抑制多胺，特别是腐胺在作为单独N源生长的番茄植物中的生物合成。通常，多胺是与生理过程相关的带正电荷的小代谢物，包括器官发生，胚胎发生，花起始和发育，叶衰老，花粉管生长，果实发育和成熟，并参与对非生物和生物胁迫的应答（Tiburcio等， et al 。，2014）。通过鸟氨酸脱羧酶（ODC）或精氨酸脱羧酶（ADC）将鸟氨酸或精氨酸脱羧，从氨基酸合成多胺（Walters，2003）。用NH 4+作为唯一N源生长的番茄植物在叶中表现出腐胺含量的增加（Fernández-Crespo等人，2015） ）。为了评估腐胺积累的重要性，将腐胺合成抑制剂DL-α-（二氟甲基）精氨酸（DFMA）和DL-α-（二氟甲基）鸟氨酸（DFMO）分别用作ADC和ODC酶的不可逆抑制剂Fallon和Phillips，1988），其目的是减少NH 4营养物诱导的细胞腐胺积累。在样品收集之前的一周内，将含有2mM DFMA和5mM DFMO的抑制剂溶液直接施用到每个罐中。
[背景] 应用程序（应用程序） 的抑制剂DFMA和DFMO通常在MS培养基和体外试验中进行（Perez-Amador等人，2002; Stes等人， 。，2011）。然而，我们需要测试这些抑制剂在体内的有效性以维持自然生长条件的目的。 Moschou 等。 ...
|