| Infection of Nicotiana benthamiana Plants with Potato Virus X (PVX)
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Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] Potato Virus X (PVX) is the type member of Potexvirus genus, a group of plant viruses with a positive-strand RNA genome (~6.4 kb). PVX is able to establish compatible infections in Nicotiana benthamiana, a commonly used host in plant virology, leading to mild symptoms, such as chlorotic mosaic and mottling. PVX has been widely used as a viral vector for more than two decades (Chapman et al., 1992; Baulcombe et al., 1995; Aguilar et al., 2015). It provides a feasible means for the systemic expression in plants of heterologous proteins, such ...
[摘要] 马铃薯病毒X（PVX）是Potexvirus属（一组具有正链RNA基因组（〜6.4kb）的植物病毒）的类型成员。 PVX能够在烟草烟草（Nicotiana benthamiana）中建立相容的感染，这是常用于植物病毒学的宿主，导致轻度症状，如褪色马赛克和斑驳。 PVX已经被广泛用作病毒载体二十多年（Chapman等人，1992; Baulcombe等人，1995; Aguilar等人。它为异源蛋白质植物中的全身表达提供了可行的手段，例如无毒性因子，具有药理学性质的蛋白质，等等（Hammond-Kosack等人， 1995; Gleba等人，2014），并且还作为通过病毒诱导的基因沉默（VACS）（Lacomme和Chapman，2008）帮助解释植物中基因功能的工具。摩擦（A）和农用过滤（B）的两种不同的方案，即允许PVX在N中的有效乘法和传播。本文详细描述本文。摩擦方法需要先前感染的液体，并且通过诱导对叶组织的机械损伤来实现感染，从而允许病毒颗粒穿透植物表面。农杆菌过滤需要先前修饰的农杆菌携带并将PVX序列递送到植物细胞中。将土壤杆菌生长直至饱和，并用注射器将其浸入植物组织中建立感染。这两种方法中的任何一种都可以成功应用，选择应主要基于材料和时间的可用性，但建议在使用嵌合病毒时使用农杆菌滤过。
背景 ...
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| Activity-based Pull-down of Proteolytic Standard and Immunoproteasome Subunits
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Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] Activity-based probes (ABP) are small organic molecules that irreversibly bind to the active center of a specific enzyme family and may be coupled to a fluorophore or an affinity tag (Li et al., 2013). Here, we describe a method to pull-down active catalytic standard and immunoproteasome subunits in cell lysates using the biotinylated, proteasome-specific ABP Biotin-Epoxomicin (Bio-EP). Covalent labeling of the active catalytic subunits with Bio-EP is followed by a pull-down using streptavidin-coated beads. After elution from the beads, enriched subunits may be detected via Western ...
[摘要] 基于活性的探针（ABP）是不可逆地结合特定酶家族的活性中心并且可以偶联至荧光团或亲和标签的小有机分子（Li等人，2013）。在这里，我们描述了使用生物素化的蛋白酶体特异性ABP生物素 - 环氧丙素（Bio-EP）在细胞裂解物中下拉活性催化标准和免疫蛋白酶体亚基的方法。用Bio-EP共价标记活性催化亚单位，然后使用链霉抗生物素蛋白包被的珠子进行下拉。从珠中洗脱后，可以通过Western印迹，串联质谱法（Li et al。，2013）或其他技术检测富集的亚单位。
背景 蛋白酶体是存在于真核细胞的细胞核和细胞质中的桶形多分子酶复合物。蛋白质降解是重要的，包括加工MHC I呈递的抗原肽，并调节许多细胞过程（Kammerl和Meiners，2016）。在造血起源的细胞中，标准（组成型）蛋白酶体通常被免疫蛋白酶体（Meiners等人，2014）所替代，其在三种不同的催化活性β-亚基的掺入中不同（图1）。
为了研究单个催化亚基的分子功能并调节生理过程，亚基特异性蛋白酶体抑制剂的发展是必不可少的。 de ...
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