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Author:
Date:
2020-03-05
[Abstract] Lipid mixing (redistribution of lipid probes between fusing membranes) has been widely used to study early stages of relatively fast viral and intracellular fusion processes that take seconds to minutes. Lipid mixing assays are especially important for identification of hemifusion intermediates operationally defined as lipid mixing without content mixing. Due to unsynchronized character and the slow rate of the differentiation processes that prime the cells for cell-cell fusion processes in myogenesis, osteoclastogenesis and placentogenesis, these fusions take days. Application of lipid ...
[摘要]
[摘要 ] 脂质混合（脂质探针在融合膜之间的分布）已广泛用于研究相对快速的病毒和细胞内融合过程的各个阶段，这些过程耗时数秒至数分钟。脂质混合测定对于鉴定在操作上定义为没有内容混合的脂质混合的半融合中间体特别重要。由于不同步的特性以及分化过程的缓慢速度，这些分化过程使细胞在成肌，破骨细胞生成和胎盘生成中引发细胞间的融合过程，因此这些融合需要几天的时间。在这些非常缓慢的融合过程中应用脂质混合测定法检测早期融合中间体时，必须考虑质膜成分的连续转换以及脂质探针在膜之间的潜在融合无关交换。在这里，我们描述了脂质混合分析在骨骼肌细胞发育和再生中成肌融合阶段的工作中的应用。我们的方法利用了基于鼠C2C12细胞的成肌分化和融合的常规体外模型。当我们观察到第一个多核细胞的外观时，我们将细胞提起并用荧光脂质DiI 作为膜探针或CellTracker TM Green 作为含量探针标记它们。通过荧光显微镜对探针在细胞之间的重新分布进行评分。半融合细胞被鉴定为用内含物和膜探针标记的单核细胞。解释必须由具有融合能力不足细胞的阴性对照系统支持，以说明脂质探针的与融合无关的交换，并将其贡献降到最低。这种方法进行了较小的修改已用于调查原代鼠成肌细胞，破骨细胞前体的融合以及由配子融合原HAP2 介导的融合，并且很可能可以用于其他缓慢的细胞-细胞融合过程。
[Bac kground ...
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Author:
Date:
2017-07-20
[Abstract] Mosquito-transmitted pathogens are among the leading causes of severe disease and death in humans. Components within the saliva of mosquito vectors facilitate blood feeding, modulate host responses, and allow efficient transmission of pathogens, such as Dengue, Zika, yellow fever, West Nile, Japanese encephalitis, and chikungunya viruses, as well as Plasmodium parasites, among others. Here, we describe standardized methods to assess the impact of mosquito-derived factors on immune responses and pathogenesis in mouse models of infection. This protocol includes the generation of ...
[摘要] 蚊子传播的病原体是人类严重疾病和死亡的主要原因之一。蚊子唾液中的组分促进血液供体，调节宿主反应，并允许有效传播病原体，如登革热，紫草，黄热病，西尼罗河，日本脑炎和基孔肯雅病毒，以及疟原虫寄生虫等。在这里，我们描述了评估蚊子衍生因子对小鼠感染模型中免疫反应和发病机制的影响的标准化方法。该方案包括产生蚊子唾液腺提取物和皮内接种小鼠耳朵。最终，使用这些技术获得的信息可以帮助揭示病原体，蚊子和哺乳动物宿主之间的相互作用的基本机制。此外，该协议还可以帮助建立疫苗或治疗剂的临床前检测改进的感染挑战模型，以考虑通过蚊子传播的自然途径。
【背景】在探测血液的同时，蚊子接种有助于喂养的唾液，但如果蚊子曾经感染过感染个体，也可能含有病原体。蚊子唾液在建立感染，促进传播，调节免疫应答和加剧西尼罗河病毒发病过程中发挥重要作用（Schneider等人，2006; Styer等人）。 ，2011），登革热病毒（Cox等人，2012; Conway等人，2014; McCracken等人，2014; Schmid ，2016），基孔肯雅病毒（Agarwal等人，2016），Semliki Forest病毒（Pingen等人，2016） ，裂谷热病毒（Le Coupanec等人，2013）和疟原虫寄生虫（Schneider等人，2011）感染。许多重要问题仍然存在，需要改进动物模型。
＆NBSP;而通过感染的蚊子接种最好地模仿自然传播，接种剂量的高度变异性和有限的昆虫设施的可用性导致这种程序的有限使用。此外，使用感染的蚊子时，不能控制唾液的含量和蚊子组分的存在或不存在。作为替代方案，未感染的雌性蚊子的“斑点喂养”，然后通过针对病原体进行真皮内接种，模拟了唾液在小鼠皮肤中的自然沉积并递送了一定剂量的病原体。 ...
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