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Date:
2016-12-05
[Abstract] Plant plasma membrane H+-ATPase, which is a P-type ATPase, couples ATP hydrolysis to H+ extrusion and thereby generates an electrochemical gradient across the plasma membrane. The proton gradient is necessary for secondary transport, cell elongation, and membrane potential maintenance. Here we describe a protocol for measurement of the ATP hydrolytic activity of the plasma membrane H+-ATPase from Arabidopsis thaliana leaves.
[摘要] 作为P型ATP酶的植物质膜H sup + -ATPase将ATP水解耦合到H + +/- 挤出，从而在质膜上产生电化学梯度。质子梯度对于二次转运，细胞伸长和膜电位维持是必需的。这里我们描述用于测量来自拟南芥叶片的质膜H + -ATPase的ATP水解活性的方案。
关键词： strong> 拟南芥，ATP水解活性，原钒酸盐，P-型ATP酶，血浆膜H + -ATPase
质膜H + -ATPase活性的测定对于阐明其功能和调节机制是重要的。然而，有时难以确定质膜H sup + -ATP酶的ATP水解活性，因为植物细胞含有许多ATP水解酶。该协议是基于Uemura和Yoshida（1986）和Kinoshita等人的出版物开发的。 （1995）。我们使用KNO 3作为V型ATP酶的抑制剂，钼酸铵作为酸性磷酸酶的抑制剂，寡霉素作为F型ATP酶的抑制剂，NaF作为磷酸酶的抑制剂（Shimazaki和Kondo ，1987; Kinoshita等人，1995）。原钒酸盐抑制P型ATP酶，并且因此可以通过评估来自ATP水解的钒酸盐敏感性P 1释放来用于测量质膜H sup + -ATP酶的活性。释放的P 1与钼酸盐反应形成蓝色络合物，然后可以通过测量在750nm的吸收来量化。
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