| Random Insertional Mutagenesis of a Serotype 2 Dengue Virus Clone
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Author:
Date:
2018-08-20
[Abstract] Protein tagging is a powerful method of investigating protein function. However, modifying positive-strand RNA virus proteins in the context of viral infection can be particularly difficult as their compact genomes and multifunctional proteins mean even small changes can inactivate or attenuate the virus. Although targeted approaches to functionally tag viral proteins have been successful, these approaches are time consuming and inefficient. A strategy that has been successfully applied to several RNA viruses is whole-genome transposon insertional mutagenesis. A library of viral genomes, each ...
[摘要] 蛋白质标记是研究蛋白质功能的有效方法。然而，在病毒感染的情况下修饰正链RNA病毒蛋白可能特别困难，因为它们的紧密基因组和多功能蛋白意味着即使很小的变化也可以使病毒失活或减弱。尽管功能性标记病毒蛋白的靶向方法已经成功，但这些方法耗时且效率低。已经成功应用于几种RNA病毒的策略是全基因组转座子插入诱变。通过细胞培养中的传代选择病毒基因组文库，每个文库含有单个随机放置的小插入，并且可以使用下一代测序（NGS）鉴定插入位点。在这里，我们描述了用于登革病毒16681株血清型2的转座子诱变的方案。含有短随机放置插入物的突变登革病毒文库通过哺乳动物细胞传代，插入由有活力后代的NGS定位。该方案分为四个阶段：登革热cDNA克隆的转座子诱变，病毒基因组转染到允许细胞，分离病毒后代基因组和测序文库制备。
【背景】 ...
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| Single-step Marker Switching in Schizosaccharomyces pombe Using a Lithium Acetate Transformation Protocol
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Author:
Date:
2016-12-20
[Abstract] The ability to utilize different selectable markers for tagging or mutating multiple genes in Schizosaccharomyces pombe is hampered by the historical use of only two selectable markers, ura4+ and kanMX6; the latter conferring resistance to the antibiotic G418 (geneticin). More markers have been described recently, but introducing these into yeast cells often requires strain construction from scratch. To overcome this problem we and other groups have created transformation cassettes with flanking homologies to ura4+ and kanMX6 ...
[摘要] 利用不同的选择标记来标记或突变粟酒裂殖酵母中的多个基因的能力受到仅仅两种可选择标记的历史使用的阻碍，即 +和 kanMX6 ;后者赋予抗生素G418（遗传霉素）抗性。最近已经描述了更多的标记物，但是将它们引入酵母细胞通常需要从头开始施加应变。为了克服这个问题，我们和其他团队已经创建了具有与 + 和 kanMX6 的侧翼同源性的转换盒，这使得能够有效和省时的方式在现有的突变或标记的裂变酵母菌株中交换标记。
＆nbsp;在这里，我们提出了裂殖酵母，粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe）中醋酸锌转化的单步标记转换方案。以下我们将介绍如何将 ura4 + 标记交换到kanMX6 ， natMX4 或 hphMX4标记，其分别对抗生素G418，海参（clonNAT）或潮霉素B提供抗性。我们还详细介绍了如何交换营养标记的任何 MX 标记，例如 arg3 + ， his3 + ， leu1 + 和 ura4 + 。
背景 这种用于粟酒裂殖酵母的单步骤标记交换方案允许将标记有类型的抗生素标记的任何标记或突变的基因替换为营养标记物（含有arg3 + ， + ，并且已经构建了 ura4 + ）并且为任何 MX交换遗传 ura4 + ...
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