| Improved Oviduct Transfer Surgery for Genetically Modified Rat Production
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Author:
Date:
2017-08-20
[Abstract] Rat embryo transfer surgeries are becoming more common with targeted nucleases increasing the demand for rat models. This protocol details pre-surgical preparation, improved surgical techniques for placing embryos into the oviduct, and post-surgical care of rats to parturition. Direct application of mouse oviduct transfer protocols results in limited success in the rat. By combining techniques from several widely used protocols in the field, increased yield of live pups born to healthy dams is possible. This protocol is distinct from previously published protocols by the use of a modified ...
[摘要] 大鼠胚胎移植手术正变得越来越普遍，靶向核酸酶增加对大鼠模型的需求。 该协议详细介绍了手术前准备，将胚胎置入输卵管的改进的外科技术以及大鼠分娩后的手术后护理。 直接应用小鼠输卵管转移方案在大鼠中的成功有限。 通过组合来自现场广泛使用的几种方案的技术，可以提高健康水坝出生的活的小狗的产量。 该方案与以前公开的方案不同，通过使用改进的麻醉方案（Smith等人，2004），使用止痛剂，添加腹膜缝线（Filipiak和Saunders，2006），切割位置和每只动物的转移数 （Krinke等，2000）。
【背景】在显微注射和胚胎移植手术后可靠地生产健康小狗的能力对于模型创建至关重要，特别是创建多个创始动物的可能性增加，对观察到的表型有信心。因此，即使使用不同浓度的注射液，出生率相对于报告的比例较低，系统地对现有的小鼠胚胎移植方案进行了修改，以更好地适应大鼠。
多个出版物描述了将胚胎转移到两侧子宫的两个角的输卵管;然而，这增加了动物在麻醉下的时间长度，并且需要中线切口并穿过腹膜腔以到达侧生殖道，或者产生两个单独的切口（Krinke等人，2000）。这些选择不太理想，因为这两个选项都会增加动物的压力，从而增加妊娠中止的可能性。通过在术前和术后创建单侧切口并施用镇痛，动物的压力被最小化（Smith等人，2004）。使用异氟烷可注射麻醉剂可以最大程度地降低毒性风险（如三溴乙醇所见），IP注射损伤和重复给药，所有这些都与啮齿动物手术后的死亡率相关（Bernal ...
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| A Novel Mouse Skin Graft Model of Vascular Tumors Driven by Akt1
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Author:
Date:
2017-07-05
[Abstract] To investigate whether endothelial Akt1 activation is sufficient to induce vascular tumor formation in the skin, we have developed a skin graft model in which a skin fragment from transgenic donor mice with inducible and endothelial cell-specific overexpression of activated Akt1 (myrAkt1) is grafted into the skin of wild type recipient mice. The donor skin successfully engrafts after two weeks and, more importantly, vascular tumor develops at the site of transgenic skin graft when myrAkt1 expression is turned on. This skin graft model is a novel approach to investigate the biological impact ...
[摘要] 为了研究内皮Akt1的活化是否足以诱导皮肤血管肿瘤的形成，我们开发出一种皮肤移植模型，其中转基因供体小鼠的皮肤片段具有诱导型和内皮细胞特异性过度表达的活化的Akt1（myrAkt1）被移植入 野生型受体小鼠的皮肤。 供体皮肤在两周后成功植入，更重要的是，当myrAkt1表达被打开时，血管肿瘤发生在转基因皮肤移植物的位点。 这种皮肤移植模型是一种新颖的方法，以时间，局部和器官特异性方式研究关键信号转导分子的生物学影响。
【背景】我们的研究重点是调查Akt1在血管肿瘤发展中的作用。为了确定内皮细胞中Akt1的激活是否足以驱动血管瘤形成，我们开发并发表了一种血管肿瘤的皮肤移植模型（Phung et al。 ...
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| Isolation of Highly Pure Primary Mouse Alveolar Epithelial Type II Cells by Flow Cytometric Cell Sorting
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] In this protocol, we describe the method for isolating highly pure primary alveolar epithelial type II (ATII) cells from lungs of naïve mice. The method combines negative selection for a variety of lineage markers along with positive selection for EpCAM, a pan-epithelial cell marker. This method yields 2-3 x 106 ATII cells per mouse lung. The cell preps are highly pure and viable and can be used for genomic or proteomic analyses or cultured ex vivo to understand their roles in various biological processes.
[摘要] 在这个协议，我们描述从初始小鼠的肺分离高纯度原发性肺泡上皮细胞类型（ATII）细胞的方法。该方法结合对多种谱系标志物的阴性选择以及对于Ep上皮细胞标记物EpCAM的阳性选择。该方法每小鼠肺产生2-3×10 6个ATII细胞。细胞制品是高度纯的和可行的，并且可以用于基因组或蛋白质组分析或培养离体以了解他们在各种生物过程中的作用。
[背景] 肺的内表面由上皮细胞排列，上皮细胞的类型在形态上和功能上随着肺内的位置而变化。 ATII细胞是两种类型的上皮细胞中的一种，其排列在肺泡壁上并且已经被描述为在表面活性剂合成和分泌中起关键作用。它们也是肺内第一道防线的一部分，并且涉及在肺部感染或过敏期间引发和调节免疫应答。它们还被认为在远端肺中充当具有增殖能力和损伤后修复上皮的能力的祖细胞。 ATII分离的可用方法不产生超过80-85％纯度的细胞制品，使得它们不适合于mRNA和蛋白质表达的可靠分析。本文所述的方法是对现有方法的改进，并产生具有最高纯度的小鼠原代ATII细胞制备物，因此可以可靠地用于表达分析。对于该方法的进一步讨论，我们将读者指向该协议起源的原始出版物（Sinha等人，2016）。
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