| Extraction and Quantification of Sphingolipids from Hemiptera Insects by Ultra-Performance Liquid Chromatography Coupled to Tandem Mass Spectrometry
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Author:
Date:
2021-02-20
[Abstract] Sphingolipids are major structural components of endomembranes and have also been described as an intracellular second messenger involved in various biological functions in all eukaryotes and a few prokaryotes. Ceramides (Cer), the central molecules of sphingolipids, have been depicted in cell growth arrest, cell differentiation, and apoptosis. With the development of lipidomics, the identification of ceramides has been analyzed in many species, mostly in model insects. However, there is still a lack of research in non-model organisms. Here we describe a relatively simple and sensitive method ...
[摘要] [摘要]鞘脂类是endomembranes的主要结构部件和已经也被描述为参与所有真核生物和原核生物几多种生物学功能的细胞内第二信使。 神经酰胺（CER），鞘脂的中心的分子，已经在细胞生长停滞，细胞分化被描述，和细胞凋亡。随着脂质组学的发展，已经在许多物种中对神经酰胺的鉴定进行了分析，其中大多数是模型昆虫。但是，仍然缺乏对非模型生物的研究。在这里，我们描述了用于提取中相对简单和灵敏的方法N，鉴定，并在半翅目昆虫的神经酰胺的定量（棕色planthooper ），随后用超高效液相色谱-串联质谱联用（UPLC-MS / MS）。C18被用作用于对三联四极液体MAS定量检测和分析的分离柱小号光谱仪。在该方案中，采用标准曲线方法以根据可选的检测条件确认更准确的神经酰胺定量。
[背景]鞘脂是膜脂质在活体生物的第二大组和细胞结构，代谢和调节的许多方面发挥了重要作用（拉希里和Futerman，2007）。起初，人们认为鞘脂是结构相关分子的复杂家族，但越来越多的研究表明鞘脂参与了许多细胞过程（Mao和Obeid ，2008 ）。神经酰胺（CER）是必不可少的牵连生物活性脂质的各种细胞生物过程从细胞生长调控细胞死亡和衰老（Futerman和Hannun，2004 ; ...
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| Expression and Purification of the GRAS Domain of Os-SCL7 from Rice for Structural Studies
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Author:
Date:
2017-02-05
[Abstract] GRAS proteins, named after the first three members GAI, RGA and SRC, has been found in 294 embryophyta species and is represented by 1,035 sequences. They belong to a plant-specific protein family and play essential roles in plant growth and development. Proteins in this family are defined as minimally containing a conserved GRAS domain, which is about 350-450 resides and can be subdivided into five distinct motifs with their name derived from the most prominent amino acids: LRI (leucine-rich region I), VHIID, LRII (leucine-rich region II), PFYRE and SAW and mainly function in the interaction ...
[摘要] 以前3个成员GAI，RGA和SRC命名的GRAS蛋白质已被发现在294个胚胎种，并由1,035个序列表示。它们属于植物特异性蛋白质家族，在植物生长和发育中起重要作用。该家族中的蛋白质被定义为最低限度地含有保守的GRAS结构域，其约为350-450个，并且可以细分为五个不同的基序，其名称源自最突出的氨基酸：LRI（富含亮氨酸的区域I），VHIID ，LRII（富含亮氨酸的区域II），PFYRE和SAW，并且主要在GRAS蛋白质与其配偶体之间的相互作用中起作用（Sun等人，2012）。通过系统发育分析，GRAS家族可以分为十多个亚科，其中SCL4 / 7是一个重要的亚组，对应对环境压力有作用。这里我们描述了Os-SCL7（水稻SCL4 / 7成员）的GRAS结构域的表达和纯化的详细方案，使我们能够使其结晶并确定其结构。
背景 GRAS蛋白是一个大家族，在植物发育和信号转导中起重要作用。结果表明，一些家庭成员如DELLAs起到GA响应植物生长的抑制作用，是GA信号通路（Murase等人，2008）中的关键调控目标，NSP1和NSP2起重要作用在调节结瘤发育和信号传导（Kaló等人，2005）中，蛋白质SCR和SHR一起在控制根和芽的径向图案中起重要作用（Helariutta et ...
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| Cryopreservation Protocol for Chlamydomonas reinhardtii
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Author:
Date:
2016-11-20
[Abstract] Cryopreservation is commonly used for storing viable cells, tissues, organs or organisms at ultralow temperatures, and usually involves immersion in liquid nitrogen at -196 °C. Here we provide a detailed cryopreservation protocol for C. reinhardtii based on Crutchfield’s work (Crutchfield et al., 1999), with minor changes (Yang and Li, 2016). In this study, we compared the cryoprotection effect of two common cryopreservation agents (CPAs), methanol and DMSO. Furthermore, the two-step cryopreservation process was divided into five stages to study the factors affecting the ...
[摘要] 冷冻保存通常用于在超低温度下储存活细胞，组织，器官或生物体，并且通常包括在-196℃的液氮中浸泡。在这里，我们提供了一个详细的cryopreservation协议。基于Crutchfield的工作（Crutchfield et al 。，1999），并进行微小的改变（Yang和Li，2016）。在这项研究中，我们比较了两种普通冷冻保存剂（CPAs），甲醇和DMSO的冷冻保护作用。此外，两步冷冻保存过程分为五个阶段，以研究影响每个阶段的生存率的因素。我们发现使用甲醇作为CPA，结合此处概述的冷却过程（以1℃/min的速率从25℃冷却至-55℃）对于冷冻保存后的细胞存活是不可缺少的。这里描述的解冻过程（在35℃解冻5分钟）对于提高存活率也是重要的。
[背景] 现在，冷冻保存经常用于储存C的转基因品系或突变系。以及涉及该生物体的实验需要。 Morris等人。 （1979）讨论了不同CPA在冷却中的影响，温度和存活率之间的关系，有或没有CPA，和冷却速度。他们发现，加入甲醇后，半致死温度是测试的所有CPA中最低的（-14.4℃），而DMSO的温度为-4.9℃（Morris等人， 1979）。
通过在室温下在7％（v/v）DMSO中储存过夜，随后在-70℃下储存，Johnson和Dutcher（1993）获得了最高的活力，在10℃下接近10％。莱茵哈德文化。然而，存活率可以在C中被限制。特别是在我们使用的细胞系CC-125中，尽管作者的主张是由液体培养引起的，但存活率仅为0.34％。然而，该方法是耗时的并且导致低的细胞存活力。 ...
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