| RNA Strand Displacement Assay for Hepatitis E Virus Helicase
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] The hepatitis E virus (HEV) helicase uses ATP to unwind the RNA duplexes. This is an essential step for viral replication. This protocol aims to measure the double strand RNA unwinding activity of the HEV helicase.
[摘要] 乙型肝炎病毒（HEV）解旋酶使用ATP来解开RNA双链体。 这是病毒复制的重要步骤。 该方案旨在测量HEV解旋酶的双链RNA展开活性。
已经使用放射性标记的双链RNA（dsRNA，Karpe等人，2010）测量了HEV解旋酶的RNA展开活性。 我们已经建立了用于测量HEV解旋酶的dsRNA展开活性的非放射性测定方案。 该测定利用荧光标记的RNA来测量从人肝癌细胞纯化的HEV解旋酶蛋白的活性，从而消除了处理放射性物质的需要。
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| RNA-dependent RNA Polymerase Assay for Hepatitis E Virus
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Author:
Date:
2017-04-05
[Abstract] RNA-dependent RNA polymerase (RdRp) is essential for the replication of viral RNA for RNA viruses. It synthesizes the complementary strand of viral genomic RNA, which is used subsequently as a template to generate more copies of viral genome. This assay measures activity of the hepatitis E virus (HEV) RdRp. In contrast to protocols available to assay the RdRp activity of many other viruses, this assay utilizes DIG-11-UTP as a nonradioactive alternative to 32P-UTP, thereby increasing the convenience of performing the assay.
[摘要] RNA依赖性RNA聚合酶（RdRp）对RNA病毒的病毒RNA的复制至关重要。 它合成病毒基因组RNA的互补链，其随后用作模板以产生更多的病毒基因组拷贝。 该测定法测定戊型肝炎病毒（HEV）RdRp的活性。 与可用于测定许多其他病毒的RdRp活性的方案相比，该测定法使用DIG-11-UTP作为32P-UTP的非放射性替代物，从而增加了进行测定的便利性。
没有测定可测量HEV RdRp的活性。 已经使用放射性标记的核苷酸（Behrens等人，1996）在少数其他病毒如丙型肝炎病毒中测量了RdRp活性。 我们已经调整了Behrens等人所描述的协议。 （1996），并将其修饰为建立非放射性测定方案，其依赖于将DIG-11-UTP掺入反义RNA链中作为HEV RdRp的活性的量度。 该测定使用体外合成的病毒RNA片段作为模板，以使用基于化学发光的策略来测量从人肝癌细胞纯化的HEV RdRp蛋白的活性。
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| Measuring Procaspase-8 and -10 Processing upon Apoptosis Induction
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Author:
Date:
2017-01-05
[Abstract] Apoptosis or programmed cell death is important for multicellular organisms to keep cell homeostasis and for the clearance of mutated or infected cells. Apoptosis can be induced by intrinsic or extrinsic stimuli. The first event in extrinsic apoptosis is the formation of the Death-Inducing Signalling Complex (DISC), where the initiator caspases-8 and -10 are fully activated by several proteolytic cleavage steps and induce the caspase cascade leading to apoptotic cell death. Analysing the processing of procaspases-8 and -10 by Western blot is a commonly used method to study the induction of ...
[摘要] 细胞凋亡或程序性细胞死亡对于多细胞生物保持细胞稳态和清除突变或感染细胞是重要的。 细胞凋亡可以由内在或外在的刺激诱导。 外源性凋亡中的第一个事件是死亡诱导信号复合物（DISC）的形成，其中引发剂半胱天冬酶-8和-10通过若干蛋白水解切割步骤完全活化并诱导胱天蛋白酶级联导致凋亡细胞死亡。 通过蛋白质印迹分析procaspases-8和-10的处理是通过死亡受体刺激研究凋亡诱导的常用方法。 为了分析procaspase-8和-10切割，用死亡配体刺激细胞不同的时间间隔，裂解，并使用抗半胱天冬酶-8和抗半胱天冬酶-10抗体进行蛋白质印迹分析。 这可以监测胱天蛋白酶切割产物，从而诱导细胞凋亡。
背景 胱天蛋白酶是作为无活性酶原产生并被蛋白水解切割活化的蛋白酶（Degterev等人，2003）。胱天蛋白酶级联的激活是凋亡细胞死亡期间最重要的事件，其诱导凋亡细胞的典型生化和形态学变化。与非活性执行者procaspases相反，启动子胱天蛋白酶8/9/10具有限制性蛋白水解活性，并在高分子量复合物中完全活化（Lavrik等人，2005）。促凋亡受体TNF-R1（肿瘤坏死因子受体1），CD95 / ...
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